2006 Fiscal Year Annual Research Report
骨組織に特異的に発現する新規コラーゲン分子(マウス24型α1鎖)の機能解析
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17591584
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| Research Institution | Oita University |
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Principal Investigator |
松尾 哲孝 大分大学, 医学部, 助手 (10284788)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
住吉 秀明 大分大学, 医学部, 助手 (60343357)
濱中 良志 大分大学, 医学部, 助手 (60274750)
吉岡 秀克 大分大学, 医学部, 教授 (00222430)
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| Keywords | コラーゲン / 骨組織 / 転写 / 骨分化 |
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| Research Abstract |
マウス24型コラーゲンα1鎖の発現調節機構を解析するために、まずこの遺伝子の全cDNAおよびこの遺伝子のプロモーターに関与しているgDNAをクローニングした。次に、Oligo-Cap Race法によって、その転写開始領域を決定した。
次に、転写調節機構を解析するために、まず、RT-PCR法によって、培養細胞での発現を検討し、ラット骨芽細胞(ROS17/2.8)に発現していることを確認した。次に、ルシフェラーゼ遺伝子のコンストラクトを作製し、ROS細胞を用いてその基本プロモーター領域を決定した。
更に、基本プロモーター領域に関与する転写因子を調べるために、この領域のプローブを作製し、EMSAによりプロモーター活性に不可欠な領域を決定すると共に、その領域に結合する転写因子がCREB/ATFであることを同定した。
一方、組織発現に関しては、in situ hybridization用のプローブも作製し、マウスの発生段階でこの分子が骨組織に特異的に発現している事を見いだし、同様に、マウスおよびラットの培養細胞での発現も検討し、幾つかのosteoblast細胞にも発現している事も確認すると共に、未分化間葉系細胞を骨に分化させる事によって、XXIV型コラーゲンの発現を誘導することが出来た。
更に、特異抗体の作製および大腸菌＆培養細胞でのリコンビナントタンパクの発現も行い、タンパクレベルの発現も確認した。
加えて、この遺伝子とファミリーと考えられるマウス27型コラーゲンα1鎖遺伝子の解析を進め、この遺伝子の転写開始点を決定すると共に、これまで報告されていない新しいエクソンが存在する事も明らかにした。
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Research Products
(2 results)
