| Research Abstract |
近年増加傾向にある卵巣明細胞腺癌(CCC)はHER-2が過剰発現しており,その化学療法低感受性との関連が示唆されている.またCCCはp53変異の頻度が低いことが知られている.一方,アデノウイルス5型E1A蛋白は,HER-2発現を抑制するとともに,p53を安定化し殺細胞作用を示す.また,癌性腹膜炎は遺伝子治療の至適標的と考えられる.本研究では,CCCに対するアデノウイルスE1A遺伝子治療の有効性を明らかにすることを目的とした.
CCC由来細胞株4株(RMG-I,SMOV-2,OVTOKO,OVSAYO)を用い,アデノウイルス5型E1A発現ベクター(Ad.E1A(+))のCCCに対する殺細胞効果をMTT assayおよびトリパンブルー排出試験で検討するとともに,アポトーシスをAnnexin V染色およびDNA ladderingで検索した.E1A,p53,Bax,Bcl-2およびCaspase 9蛋白発現をウエスタンブロット法にて検索した.次に,RMG-I細胞(1×10^7個)をSCIDマウス腹腔内に注入してCCC癌性腹膜炎モデルを作成し,移植4日目からAd.E1A(+)を腹腔内投与した.累積生存率をKaplan-Meier法により算出し治療効果を検討するとともに,E1Aおよびp53蛋白発現を免疫組織化学で検索した.
Ad.E1A(+)はアポトーシスを誘導し細胞増殖を著明に抑制した.一方,E1A遺伝子導入後にp53,Baxおよび活性化Caspase 9蛋白発現が増加した.p53 siRNAはE1A遺伝子導入によるアポトーシスならびに上記蛋白の発現を抑制した.癌性腹膜炎モデルにおいて,腫瘍組織内E1Aおよびp53蛋白発現はAd.E1A(+)投与でのみ観察された.Ad.E1A(+)投与群の生存率は無投与対照群およびコントロールウイルス投与群に比して有意に高かった.
以上の成績から,卵巣明細胞腺癌に対するE1A遺伝子治療の有効性が示されるとともに,その作用機序にはp53依存性アポトーシスが関与していることが示唆された.
現在,卵巣漿液性腺癌およびCCC由来細胞株を用いて,E1A遺伝子導入と抗癌剤(パクリタキセル,シスプラチン等)との併用効果を検討中である
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