網膜微小循環障害での白血球動態異常の分子メカニズムの解明-腫瘍壊死因子αの意義-

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17591849
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 吉田 宗徳 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (60273447)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小椋 祐一郎 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (70191963) ; 櫻井 英二 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (30305528)
• Keywords: 白血球 / 網膜微小循環 / TNF-α

Research Abstract

ラットを用いたTNF-αによる眼内炎症モデルを作成した。ラット眼内に0.01-0.1ngのTNF-αを注入し、その後経時的に生体顕微鏡で観察すると、注入後12-24時間をピークとする炎症性の変化が見られた。炎症の強さをスコア化して評価すると、炎症の強さは注入したTNF-αの容量に依存していた。acridine orange digital fluorography(AODF)を用いた観察では、炎症惹起眼において網膜動静脈の拡張がみられ、注入後24時間での白血球のローリング、網膜内への集積はともに著明に増加していた。
次にヒト網膜血管内皮細胞をシート状に培養し、その上でヒト多核白血球を培養したのちにリンスし、残存した白血球数をmyeloperoxydase(MPO)アッセイにより定量した。この際、培養上清中に0.1-10ng/mlのTNF-αを添加してその影響を調べた。5ng/mlのTNF-αを添加した群ではコントロールに対し、接着する白血球数は約40%増加した。また、この接着白血球数の増加は培養上清に同時に抗ICAM-1抗体を添加することによって10%程度にまで減少した。
同様の実験をTNF-αを添加する代わりに高グルコース刺激、高インスリン刺激で行うと、いずれも網膜血管内皮細胞への白血球の接着は増加した。しかし、高グルコース、高インスリン刺激を行った網膜血管内皮細胞の培養上清中にはTNF-αの増加は見られなかった。