先天性横隔膜ヘルニア肺低形成に対する遺伝子治療の研究

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17591862
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 鎌田 振吉 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40161202)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 臼井 規朗 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30273626) ; 寒川 賢治 国立循環器病センター研究所, 生化学部, 部長(研究職) (00112417)
• Keywords: 先天性横隔膜ヘルニア / アドレノメデュリン / 遺伝子治療 / 肺低形成

Research Abstract

先天性横隔膜ヘルニア(以下CDH)を始めとする高度の肺低形成を合併する疾患の予後は、様々な治療法の確立にも拘わらず依然極めて不良である。本病態に対する治療の研究は、肺の胎生期および新生児期の発育をいかに促進し得るかという点に集約されるが、そのためには肺血管床の分化・発育、増生も重要な因子であると考えられている。我々は強力な血管拡張作用を有すると同時に、種々の臓器の器官発生への関与が示唆されているアドレノメデュリン(以下AM)の肺発育促進因子としての作用に着目し、本実験を行った。
(1)SDラット(満期22日)妊娠9.5日にオリーブ油に溶解したナイトロフェン400mg/kgを投与し、CDHモデルを作製した。対照群はオリーブオイルのみの投与を行った。妊娠日齢13.5に肺を採取し、胎児肺の臓器培養を72時間行った。培養液にAMをそれぞれ0、50、100、200μmol/L添加し、肺芽の分裂数を計測するとともに、肺組織中のFGF-10、BMP4をR T-PCRにて測定した。CDHモデルの肺芽分裂数は2.0±0.3と対照群(3.6±0.5)に比し有意に低下していたが、AMの添加により有意な増加を認めた(3.3±0.6、3.5±0.5、3.4±0.6)。肺組織中BMP4はAM100μmol/L添加により有意な発現の増加を認めたが、FGF-10では有意な変化を認めなかった。現在、同一系で肺芽分裂促進効果が期待されるレチノールやNOの作用との比較を行っている。
(2)in vitroでの遺伝子導入実験に備えAMcDNAベクターを調製した。また気管内投与法としてDNA-gelatin複合体を調製し、予備実験を行った。