2006 Fiscal Year Annual Research Report
パラコート急性毒性機構に関わるNADH-キノンオキシドリダクターゼmの研究
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17591899
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| Research Institution | KANAZAWA MEDICAL UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
島田 ひろき 金沢医科大学, 医学部, 講師 (60278108)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平井 圭一 金沢医科大学, 医学部, 教授 (60027092)
島村 英理子 金沢医科大学, 医学部, 講師 (00267741)
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| Keywords | パラコート / ミトコンドリア / 細胞毒性 / voltage-dependent anion channel / フリーラジカル生成 / 活性酸素 / 外膜チャネル / NADH |
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| Research Abstract |
除草剤パラコートの急性細胞毒性に関与するミトコンドリア外膜酵素NADH-キノンオキシドリダクターゼm(NQO_m)の本態と機能についで以下の研究成果を得た。
1.単離ミトコンドリアのDCF蛍光解析法において,NADHとパラコートを同時添加するとNQO_m活性による過酸化水素生成が見られた。この活性は外膜チャネルのvoltage-dependent anion channel(VDAC)に対する抗体およびアニオンチャネルブロッカーDIDSにより抑制された。
2.単離ミトコンドリアにNADHとパラコートを同時添加すると,ミトコンドリアが膨潤破壊されるが,この反応は抗VDAC抗体によって抑制された。
3.ミトコンドリア外膜より精製したNQO_m画分を抗VDAC抗体で免疫沈降処理するとその活性が抑制された。また,Western blot法で画分中にVDAC蛋白が検出された。
4.VDAC1プラスミドを導入したVDAC高発現HeLa細胞にパラコートを添加すると,対照プラスミド導入細胞に比べで高い細胞内過酸化水素生成がみられた。また,パラコートに対する50%増殖阻害速度(IC_<50>)が対照細胞に比べで低下した。
5.siRNAによるVDAC1ノックダウン細胞ではパラコートによる細胞内過酸化水素生成が抑制され,IC_<50>値が対照細胞より上昇した。
以上の結果より,VDACがNQO_mの構成蛋白質としでパラコート細胞毒性に関与していることが明らかとなった。
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