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2005 Fiscal Year Annual Research Report

GGYGG構造を標的とする新規タンパク質架橋方法の開発

Research Project

Project/Area Number 17658026
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

藤原 晴彦  東京大学, 大学院・新領域創成科学研究科, 教授 (40183933)

Keywords昆虫 / 表皮タンパク質 / GGYGG構造 / タンパク質架橋 / チロシナーゼ / 発現タブ / 新規タンパク質 / プロテインチップ
Research Abstract

我々は、カイコの皮膚タンパク質GCP1の中に特徴的なGGYGG構造がタンパク質の架橋に関わることを見出した。今年度は、このGGYGG構造を利用したベクターを構築するとともに、GGYGGタグをN末とC末につけたタンパク質の架橋の効率を比較した。
(1)N末端・C末端GGYGGタグベクターの構築と架橋解析
pET発現ベクターにBFPタンパク質を組み込み、そのN末端部にGGYGGを3-4回繰り返したポリペプチド(GGYGGタグ)領域を結合させた改良型発現ベクターを構築した。大腸菌で発現・精製したGGYGGタグつきBFPを回収し、チロシナーゼを作用させたところ、CBB染色法、BFPによる蛍光発色いずれにおいても、元の分子量2倍から3倍の架橋産物が確認された。GGYGGタグをつけていないBFPにおいては架橋は全く見られないことから、このタグを用いることによりあらゆるタンパク質の架橋が可能となる見通しがついた。N末とC末の間の架橋効率に大きな差はなかった。
(2)GGYGG類縁配列ベクターの構築
多くの硬いタンパク質中にはGGYGGとは若干異なる構造の反復配列が多数見られヒトの細胞質ケラチンCK9に含まれるGSYGG、カイコ絹糸のフィブロインH鎖に含まれるAGYGA、カイココリオンタンパク質AL11に含まれるGGYGLなどの配列をGGYGGタグの代わりにベクターに組み込んだコンストラクトを作成した。

  • Research Products

    (7 results)

All 2005

All Journal Article (6 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Functional roles of read-through 28S rRNA sequence in in vivo retrotransposition of non-LTR retrotransposon, R1Bm.2005

    • Author(s)
      Anzai T., Osanai, M., Hamada, M., Fujiwara, H.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res. 33

      Pages: 1993-2002

  • [Journal Article] An extraordinary retrotransposon family encoding dual endonucleases2005

    • Author(s)
      Kojima, K.K., Fujiwara, H.
    • Journal Title

      Genome Res. 15

      Pages: 1106-1117

  • [Journal Article] Telomere-specific non-LTR retrotransposons and telomere maintenance in the silkworm, Bombyx mori2005

    • Author(s)
      Fujiwara, H., Osanai, M., Matsumoto, T., Kojima, K.K.
    • Journal Title

      Chromosome Res 13

      Pages: 455-467

  • [Journal Article] Eukaryotic translation coupling in UAAUG stop-start codons for the bicystronic RNA translation of non-LTR retrotransposon SART1.2005

    • Author(s)
      Kojima, K.K.Matsumoto, T., Fujiwara, H.
    • Journal Title

      Mol.Cell.Biol. 25

      Pages: 7675-7686

  • [Journal Article] Long-term inheritance of the 28S rDNA-specific retrotransposon R22005

    • Author(s)
      Kojima, K.K., Fujiwara H.
    • Journal Title

      Mol.Biol.Evol. 22

      Pages: 2157-2165

  • [Journal Article] Melanin-synthesis enzymes co-regulate stage-specific larval cuticular markings in the swallowtail butterfly, Papilio xuthus.2005

    • Author(s)
      Eutahashi, R., Fujiwara, H.
    • Journal Title

      Development, Genes and Evolution 215

      Pages: 519-529

  • [Book] 放送大学教材「分子生物学]分担執 筆第2,6,7章、2005

    • Author(s)
      藤原晴彦
    • Total Pages
      197
    • Publisher
      放送大学教育振興会

URL: 

Published: 2007-04-02   Modified: 2016-04-21  

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