2005 Fiscal Year Annual Research Report
酵母を用いたインフルエンザウイルスゲノム複製・転写系の確立と宿主因子の探索
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17659133
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
永田 恭介 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (40180492)
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| Keywords | インフルエンザウイルス / 酵母 / 逆遺伝学 / 宿主因子 / 複製 / 転写 / RNP複合体 / GFP |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、動物細胞を宿主とするインフルエンザウイルスのゲノムの複製とウイルス遺伝子の転写を酵母細胞の中で行わせる系を確立し、ついで遺伝学的な手法を用いてこれらの過程に関与する宿主因子を同定しようというものである。酵母では全ゲノム配列が決定されており、ウイルスRNA合成に関連した変異体の相補試験で因子を簡便に同定できる。相同性を基盤に、同定された因子の動物細胞オルソログの機能解析を行なう。
cell-freeウイルスRNA合成系を用いて、酵母より調製した核抽出液中にRNA合成を促進する宿主因子が存在することを明らかにした。スフェロプラスト化した酵母を用いて、ウイルス粒子から調製した転写・複製の基本ユニットであるRNP複合体(マイナス鎖ウイルスRNAゲノム+ウイルスRNAポリメラーゼ+NP複合体)を導入することでウイルスRNA(ウイルスmRNA、複製中間体である相補鎖cRNA、および増幅された子孫ウイルスRNA)が合成される系を確立した。GFPレポーター/マーカー遺伝子を挿入したウイルスRNAを作成し、RNP複合体と同時に酵母細胞に導入することで、その発現を確認した。現在、この系を用いて、網羅的に宿主因子のスクリーニングを行なっている。酵母変異ライブラリーを用いて、GFPレポーター/マーカー遺伝子の発現を指標に一次スクリーニングを終えた。現在、発現変動の観察された変異株について、RNA合成量の定量的な測定を行なっているところである。
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Research Products
(7 results)
