2005 Fiscal Year Annual Research Report
長期継代培養細胞を用いた視細胞イオンチャネル異常疾患研究のための実験系構築
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17659539
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| Research Institution | Asahikawa Medical College |
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Principal Investigator |
大日向 浩 旭川医科大学, 医学部, 助手 (20233257)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 晃敏 旭川医科大学, 医学部, 教授 (70125417)
高井 章 旭川医科大学, 医学部, 教授 (50126869)
成瀬 恵治 岡山大学, 大学院・医歯薬総合研究科, 教授 (40252233)
宮津 基 旭川医科大学, 医学部, 助手 (40396346)
高井 佳子 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (60396356)
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| Keywords | 網膜芽細胞腫 / 培養細胞 / イオンチャネル / 家族性停止性夜盲 / チャネル病 |
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| Research Abstract |
ヒト網膜芽細胞腫(Y79株とWERI-Rb-1株)においてnystatin法による全細胞電位固定実験をおこない、イオンチャネルの同定を試みた。その結果、tetraethylammonium(TEA)や4-aminopyridineに感受性を示す少なくとも2種類のK^+チャネル、テトロドトキシン(TTX)に感受性を示すNa^+チャネルnifedipineに比較的弱い感受性を示すCa2+チャネルなど、いずれも膜電位依存性のイオンチャネルの存在が示唆された。
RT-PCR法により、先天性停止性夜盲症(FSNB)における遺伝子変異が報告されているL型Ca^<2+>チャネルα_1-サブユニットの網膜アイソフォーム遺伝子(CACNA1F)が、少なくともmRNAレベルではヒト網膜芽細胞腫培養細胞にも発現していることを確認した。現在さらにα_2-、β_1-、β_2-、γ-およびδ-サブユニットの発現を検討中である。今後は、抗体をもちいたWestern blotの実験を進め、タンパクレベルでの発現も検討する。
現在、CACNA1FについてsiRNAをいくつか作成し、そのノックダウンを試みている。十分な発現抑制を起すsiRNAが得られたら、特に上記のCa^<2+>チャネル電流の変化に注目した電気生理学的実験を進める予定である。さらに、CACNA1Fをノックダウンしたのち、FSNBにみられるいくつかの点突然変異を人為的に組込んだものを発現させ、電気生理学的特性を調べる。
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Research Products
(1 results)
