2005 Fiscal Year Annual Research Report
RNAiを用いた顎口腔系の骨格筋量制御法の開発に関する研究
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17659648
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
森山 啓司 徳島大学, 大学院ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (20262206)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大庭 康雄 徳島大学, 大学院ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教授 (40294706)
泰江 章博 徳島大学, 大学院ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (80380046)
西 真寿美 徳島大学, 大学院ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (50380035)
井澤 俊 徳島大学, 大学院ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (30380017)
金子 和之 徳島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (40380026)
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| Keywords | RNAi / 筋分化 / 発現抑制 / マイオスタチン遺伝子 |
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| Research Abstract |
Myostatin ORFをコードするcDNAをpcDNA3.1-myc/his expression vectorの制限酵素サイトBamH I/Apa Iサイトで組み込み、Myostatin-myc/his発現ベクター(以下p-myostatin-his)を構築した。このP-myostatin-hisをSuperfect Transfection Reagent(QIAGEN)を用いてCOS-1細胞に一過性に強制発現させ、抗his抗体を用いたWestern blot法を行ったところ、約52kDaの目的タンパクの強い発現が確認された。これはmyostatin前駆体と考えられる。RNAiの効果を検索するために、myostatinに特異的な19bpの二本鎖RNA発現プラスミドpSilencer2.1-U6 neo-Myostatin(Ambion)をp-myostatin-hisとCOS-1細胞にco-transfectionし、抗his抗体を用いたWestern blot法を行った。その結果、control群(p-myostatin-his単独群、あるいはGFP遺伝子に対するsiRNAをco-transfectionした群)と比較し、明らかなmyostatin-hisの発現抑制効果が確認された。そこで、マウス筋芽細胞株C2C12細胞を用いてmyostatin-his恒常発現株を樹立し、同様にRNAiを行ったところ、特異的かつ効果的なmyostatin-hisの発現抑制が確認された。Myostatin-his恒常発現株はcontrol群と比較し、有為な細胞増殖能の低下を示したが、この現象はmyostatinに対するRNAiを行うことで回復し、増殖能はcontrol群と同レベルとなった。今後は樹立したmyostatin恒常発現株を用いて、筋芽細胞分化調節機構に対するRNAiの有効性を確認し、さらに、in vivoにおける作用を検討していく予定である。
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