2005 Fiscal Year Annual Research Report
RNAウイルスの復製に関与する宿主翻訳伸長因子の普遍的・多様的機能の解析
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17780033
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
山次 康幸 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (40345187)
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| Keywords | 翻訳伸長因子1A / ウイルス / Mドメイン |
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| Research Abstract |
RNAウイルスの複製に関与する宿主翻訳伸長因子の普遍的・多様的機能について解析するために、モデルウイルスであるTobacco mosaic virus (TMV)を用いて以下のような解析を行った。
(1)eEF1Aと植物ウイルスゲノムRNAの結合解析
データベース上に登録されている既報の翻訳伸長因子1A(eEF1A)のシークエンス情報を元にNicotiana tabacum cv XanthiからeEF1A cDNAのクローニングを行い、得られたcDNAを発現用ベクターにクローニングし、大腸菌内でeEF1Aを大量に調整した。eEF1AとTMVのゲノムRNAとの結合をGST pull-down法およびゲルシフト法で解析したところ、eEF1AがTMVゲノムRNAの3'非翻訳領域(3'UTR)と特異的に結合することが明らかになった。
(2)eEF1Aと植物ウイルス複製酵素の結合解析
大腸菌内で発現させたeEF1Aを抗原として抗体作製を行ったのちに、抗eEF1A抗体を用いた免疫沈降法によりTMV複製酵素とeEF1Aとの結合を調べた。その結果、TMV複製酵素とeEF1AがTMV感染植物細胞内で結合していることが明らかになった。TMV複製酵素とeEF1Aの結合はウイルスRNAを分解した状態でも変化なく検出されたため、これらの結合はウイルスRNAを介さない直接の結合であることが示された。さらに、GST pull-down法およびyeast two-hybrid法を用いた解析によりeEF1AはTMV複製酵素N末端のMドメインと結合することが示された。植物RNAウイルスの複製酵素とeEF1Aが結合したとする報告はこれが初めてであり、またeEF1AがRNAウイルスのゲノムRNAと複製酵素の双方に結合するという報告は植物、動物、細菌を通じてこれが初めてである。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] In vivo interaction between Tobacco mosaic virus RNA-dependent RNA polymerase and host translation elongation factor 1A.2006
Author(s)
Yamaji, Y., Kobayashi, I., Hamada, K., Sakurai, K., Yoshii, A., Suzuki, M., Namba, S., Hibi, T.
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Journal Title
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[Journal Article] The efficiency of interference of Potato virus X infection depends on the target gene.2006
Author(s)
Takahashi, S., Komatsu, K., Kagiwada, S., Ozeki, J., Mori, T., Hirata, H., Yamaji, Y., Ugaki, M., Namba, S.
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Journal Title
Virus Research 116
Pages: 214-217
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[Journal Article] Phylogenetic characteristics, genomic heterogeneity and symptomatic variation of five closely related Japanese strains of Potato virus X.2005
Author(s)
Komatsu, K., Kagiwada, S., Takahashi, S., Mori, T., Yamaji, Y., Hirata, H., Ugaki, M., Namba, S.
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Journal Title
Virus Genes 31
Pages: 99-105
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[Journal Article] A single amino acid residue of RNA-dependent RNA polymerase in the Potato virus X genome determines the symptoms in Nicotiana plants.2005
Author(s)
Kagiwada, S., Yamaji, Y., Komatsu, K., Takahashi, S., Mori, T., Hirata, H., Suzuki, M., Ugaki, M., Namba, S.
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Journal Title
Virus Research 110
Pages: 177-182
