2005 Fiscal Year Annual Research Report
神経幹細胞におけるサイトメガロウイルス感染感受性とサイクロフィリンの役割
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17790259
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
河崎 秀陽 浜松医科大学, 医学部, 助手 (90397381)
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| Keywords | サイトメガロウイルス / 神経幹細胞 / サイクロフィリン / 潜伏感染 / 神経幹細胞移植 |
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| Research Abstract |
1.サイクロフィリンAとMCMV蛋白との関連検索
サクロフィリンA(CyPA)とサイクロフィリンB(CyPB)に特異的なsiRNAを用いて内因性CyPA, CyPBの発現を低下させたところ、神経幹細胞においてCyPA発現低下のみがMCMV感染抑制を引き起こした。CyPAとの結合蛋白を調べるために、MCMV感染細胞のlysateと非感染細胞lysateを準備し、cypA抗体を用いて抗原・抗体反応後、protein Gを共有結合させたアガロースビーズを加える。分離精製後、蛋白質複合体をSDS-PAGEで分離しCBB染色を行い、western blottingのためMCMV IE1抗体で染色した。Western blottingの結果、CyPA蛋白とIE1蛋白が結合することが確認できた。現在他のCyPA蛋白と結合するウイルス蛋白を確認するため、感染細胞lysate特異的に検出された未知のバンドを回収し、プロテアーゼ消化、プロテアーゼ切断してできたペプチドをプロテインシークエンスサーにて配列を解析を試みている。
2.MCMV脳潜伏感染マウスの作成
C57BL/6マウスまたはBALB/cマウス新生児脳内にlacZを発現する変異ウイルス(RM453)を感染させ、脳内にCMV潜伏感染したマウスを作成する。感染後4〜6ヶ月後に神経細胞移植実験のrecipientとして用いた。
3.BALB/cマウスとC57BL/6マウスとラットより神経幹細胞を採取・培養
同種間、異種間神経幹細胞移植を成立させるため、BALB/c, C57BL/6マウス、ラットの新生児またはadultより神経幹細胞を採取培養する。EGF, FGF存在下で継代培養を行い、neuron, glia, oligodendrocyteへの3系統の細胞への分化を確認する。神経幹細胞を移植実験に用いた。移植後に脳に潜伏感染したMCMVが再活性化してくるか否かを現在検討中である。
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