2005 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病関連細菌由来ストレス蛋白質による樹状細胞および抗原特異的T細胞の解析
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17791568
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| Research Institution | Aichi Gakuin University |
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Principal Investigator |
田中 繁寿 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (30367619)
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| Keywords | HSP70 / Actinobacillus Actinomycetemcomitans |
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| Research Abstract |
申請者はActinobacillus Actinomycetemcomitans由来のリコンビナントDnaKの精製を行っている。
1.A.a.のDnaKに対するプライマーを以下のように設計し,目的DNAをPCR法により増幅した。
5'-cca gat cta aat ggg aaa aat tgt tgg tat tga-3'
3'-cat taa cta aac aat cta tta ttg ttt ctt aag gc-5'
2.PCR産物を1.2%アガロースゲルで泳動しゲル切り出し法により目的DNAを得た。
3.目的DNAを制限酵素(EcoR(特)およびBg(監))にて処理し、DNA Ligation Kit(TKARA)を使いpRSET Aベクター(invitrogen)に組み込んだ。
4.作成したベクターを大腸菌(TOP10F')(invitrogen)に導入した。
5.形質転換した大腸菌を単離しプラスミドを精製し、目的DNAを確認した後BL21コンピテントセル(invitrogen)に導入した。
6.単離したコンピテントセルプラスミドを酵素処理し、アガロースゲルで泳動し目的の配列が組み込まれていることを確認した。
7.現在、IPTGでタンパク質の発現を誘導し、蛋白を精製する準備を行っている。
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