2017 Fiscal Year Annual Research Report
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17H01564
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| Research Institution | Doshisha University |
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Principal Investigator |
貫名 信行 同志社大学, 脳科学研究科, 教授 (10134595)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山川 和弘 国立研究開発法人理化学研究所, その他, 研究員 (30241235)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 無髄神経 / Nav1.2 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
中枢神経における無髄神経の存在部位とその回路については一部のものを除き十分には知られていない。本研究では線条体投射線維が無髄神経であることを確立した申請者らの方法(Nat Commun2014)を中枢神経系全体に展開し、中枢神経系における無髄神経の分布、回路を明らかにすることをめざす。現段階で以下の進捗を見ている。
1)中枢神経における無髄神経の同定(貫名グループ) : 抗Nav1.2抗体をより広範な無髄神経のマーカーとして中枢神経系の無髄神経の分布を検討した。無髄線維の候補領域として、脳梁、分界条を同定し、免疫電顕によって確定した。
2)無髄神経系の特徴的なsodium channelなどの構成分子群の同定:a)既知の無髄領域、有髄領域について、Nav1.2,1.6の発現をwestern blotで検討した。 b)Golliの解析:無髄神経細胞にGolliが発現していることをmRNA,タンパク質レベルで確認するため、Gol li特異抗体を作成した。 3)コンディショナルノックアウトマウスによるNav1.2の機能解析(貫名グループ&山川): a)Nav1.2flox/floxマウスは研究分担者山川らによって作製済みである。線条体特異的にCreリコンビネースを発現するGpr88 promoter Cre マウス(Hisatsune et al. Transgnenic Res2013)と掛け合わせてNav1.2を線条体特異的にノックアウトしたマウスを作製している(山川)。 b)小脳顆粒細胞特異的Creリコンビネース発現マウスについては新潟大学から供与を受ける予定で、現在搬出待ちである(貫名グループ)。
4)Golliコンディショナルノックアウトマウス作製については最終スクリーニングの段階である（貫名グループ)。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ほぼ予定していた通りに進捗している。小脳顆粒細胞特異的Creリコンビネース発現マウスに関しては新潟大学のものが当方の目的に合いそうであるため、当初考えていたものと変更した。
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| Strategy for Future Research Activity |
1) 中枢神経における無髄神経の同定(貫名・宮崎グループ):継続→発表
2)無髄神経系の特徴的なsodium channelなどの構成分子群の同定(貫名グループ)a)線条体投射線維の Nav1.2,beta4 結合タンパク質の解析:継続 b) Golli の解析:継続、Golli 結合タンパク質の分布の検討。c)プロテオームアプローチ:無髄線維に富む領域と有髄線維に富む領域のプロテオーム解析を行う。Nav1.2結合タンパクの検討なども行う。
3)a)線条体特異的ノックアウトマウスの解析:継続 b)小脳特異的ノックアウトマウスの解析:継続
4)Golli flox/flox の作製:ES作成済みで、マウスを樹立できるかどうか検討。
5)脳梁無髄線維の起始細胞、分界条床核特異的 Cre リコンビネース発現トランスジェニックマウスのデータベース検索。存在すればそれを取得する。存在しなければ、これらの起始細胞特異的発現を示す遺伝子をAllen Brain Atlas 等を用いて探し、その遺伝子のプロモーターを取得してトランスジェニックマウスを作製する。
6)Nav1.2flox/floxマウスは研究分担者山川らによって作製済みである。線条体特異的にCreリコンビネースを発現するGpr88 pr omoter Cre マウス(Hisatsune et al. Transgnenic Res2013)と掛け合わせてNav1.2を線条体特異的にノックアウトしたマウスを解析する(山川グループ)。
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Research Products
(2 results)
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[Journal Article] Parallel homodimer structures of the extracellular domains of the voltage-gated sodium channel β4 subunit explain its role in cell-cell adhesion.2017
Author(s)
Shimizu H, Tosaki A, Ohsawa N, Ishizuka-Katsura Y, Shoji S, Miyazaki H, Oyama F, Terada T, Shirouzu M, Sekine SI, Nukina N, Yokoyama S.
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Journal Title
J Biol Chem
Volume: 292
Pages: 13428-13440
DOI
Peer Reviewed
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