2019 Fiscal Year Annual Research Report
復帰変異モザイク表皮水疱症モデルマウスの作製と新規遺伝子治療法の開発
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17H01572
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
清水 宏 北海道大学, 医学研究院, 教授 (00146672)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
新熊 悟 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (00613788)
岩田 浩明 北海道大学, 大学病院, 助教 (20397334)
西江 渉 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (20443955)
乃村 俊史 北海道大学, 大学病院, 講師 (50399911)
藤田 靖幸 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (80374437)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 表皮水疱症 / 復帰変異モザイク / 遺伝子治療 / モデルマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
復帰変異モザイクを有する表皮水疱症モデルマウスの作製：17型コラーゲンタンパクを欠損する表皮水疱症患者では、ほぼ全例で復帰変異モザイクを有することが知られている。我々は復帰変異モザイクを有する表皮水疱症モデルマウスを作製している。マウス17型コラーゲン遺伝子のexon 2およびexon 3にフレームシフト変異を誘導させたヘテロ17型コラーゲン遺伝子欠損マウスを作製した。これらのマウスを交配し、17型コラーゲンのそれぞれのアリルのexon2およびexon3にフレームシフト変異を有する複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウスの作製した。
複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウスの解析：作製した複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウスを病理組織学的手法、免疫蛍光抗体法および電子顕微鏡学的手法を用いて解析した。17型コラーゲンタンパクを欠損する表皮水疱症（接合部型表皮水疱症）患者で見られる、表皮下水疱、17型コラーゲンの発現量の減少、透明帯での裂隙形成を認め、接合部型表皮水疱症を模倣したマウスであることを確認した。
複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウス由来表皮角化細胞に対する相同組み換え誘導：マウス17型コラーゲン遺伝子のintron2領域においてDNA2本鎖切断を誘導するCRISPR/Cas9システムの作製に成功した。さらに、複合ヘテロ接合型17型コラーゲン欠損マウス由来表皮角化細胞に対し、intron2をターゲットとするCRISPR/Cas9を遺伝子導入したところ、一部の細胞で17型コラーゲンの発現量が上昇していることをフローサイトメトリー解析を用いて確認した。
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| Research Progress Status |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Efficient Gene Reframing Therapy for Recessive Dystrophic Epidermolysis Bullosa with CRISPR/Cas9.2019
Author(s)
Takashima Shota, Shinkuma Satoru, Fujita Yasuyuki, Nomura Toshifumi, Ujiie Hideyuki, Natsuga Ken, Iwata Hiroaki, Nakamura Hideki, Vorobyev Artem, Abe Riichiro, Shimizu Hiroshi
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Journal Title
Journal of Investigative Dermatology
Volume: 139
Pages: 1711-1721
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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