2018 Fiscal Year Annual Research Report
A novel cell and gene therapy for human rhabdomyosarcoma using exosome delivery system
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17H04230
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
細井 創 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20238744)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳生 茂希 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10572547)
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20285266)
菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (40453104)
宮地 充 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40584983)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 横紋筋肉腫 / CAR-T細胞 / エクソソーム / siRNA / 間葉系幹細胞 / ドラッグデリバリー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. shPF-exosomeを分泌するCAR-T細胞の作成と抗腫瘍効果の検討
横紋筋肉腫に高発現するEPHB4受容体を認識する抗原認識たんぱくと、共刺激因子、CD3z鎖遺伝子をin-frameに結合し、EPHB4CAR遺伝子を作成した。これをピギーバックトランスポゾン法でヒトT細胞に遺伝子導入することで、EPHB4-CAR-T細胞を作成した。EPHB4-CAR-T細胞は、EPHB4高発現横紋筋肉腫腫瘍細胞株に対して強力な抗腫瘍効果を示した。
さらに、PAX3-FOXO1遺伝子（PF）を特異的に発現抑制するsiRNA（siPF）でPF陽性横紋筋肉腫を処理したところ、PFの発現が強力に抑制されることを確認した。また、siPFで処理した横紋筋肉腫細胞と未処理の横紋筋肉腫細胞に対してEPHB4-CAR-T細胞の抗腫瘍効果を比較したところ、siPF処理群で抗腫瘍効果の増強が認められた。
EPHB4CAR遺伝子の下流に、U6プロモーター とshPF遺伝子を挿入した(EPHB4-CAR-shPF)。これをピギーバックトランスポゾン法でヒトT細胞に遺伝子導入することで、ヒトT細胞に遺伝子導入することで、EPHB4-CAR-T-siPF細胞を作成した。EPHB4-CAR-shPF1-T細胞の機能解析と抗腫瘍効果の評価を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画であったsiRNA発現CAR-T細胞の作成を達成することができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
siRNA発現CAR-T細胞の抗腫瘍効果、免疫疲弊遺伝子の発現解析を行うとともに、これらの遺伝子改変細胞が、エクソソームデリバリーを介してPF陽性横紋筋肉腫のPF発現を抑制することが出来るか確認する。また、担がんマウスモデルを用いた抗腫瘍効果についても検討する。
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[Journal Article] Identification of a novel BOC-PLAG1 fusion gene in a case of lipoblastoma.2019
Author(s)
Nitta Y, Miyachi M, Tomida A, Sugimoto Y, Nakagawa N, Yoshida H, Ouchi K, Tsuchiya K, Iehara T, Konishi E, Umeda K, Okamoto T, Hosoi H.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun.
Volume: 512
Pages: 49-52
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] OBP-801, a novel histone deacetylase inhibitor, induces M phase arrest and apoptosis in rhabdomyosarcoma cells.2019
Author(s)
Tomoyasu C, Kikuchi K, Kaneda D, Yagyu S, Miyachi M, Tsuchiya K, Iehara T, Sakai T, Hosoi H.
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Journal Title
Oncol Rep.
Volume: 41
Pages: 643-649
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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