がん免疫を賦活させる新規放射性核種標識薬剤を用いた革新的な放射線内用療法の開発

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17H04258
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 上原 知也 千葉大学, 大学院薬学研究院, 准教授 (10323403)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤井 博史 国立研究開発法人国立がん研究センター, 先端医療開発センター, 分野長 (80218982) ; 中野 直子 東京理科大学, 研究推進機構生命医科学研究所, 准教授 (90222166)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 制御性T細胞 / がん免疫 / 内用放射線治療

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、制御性T細胞がリンパ球の一種で放射線感受性が高いこと、放射線照射がクロスファイヤー効果により標的分子が高密度に存在する組織を効率よく殺傷しうることに注目し、我々独自が開発した腎臓への非特異的集積の少ない標識薬剤を用いた新規の放射性核種標識抗体抗制御性T細胞抗体Fabフラグメントを用いたがん免疫内容療法薬剤を開発し、従来法の課題を克服することを計画した。本年度は、制御性T細胞(Treg細胞)に対する抗体のFabフラグメントを作製、抗体FabフラグメントをGa-67およびCu-64 標識するための標識試薬NOTA-MVK-Malの作製を行った。Treg細胞に対するFabフラグメントの精製は分子篩HPLCを用いることで達成した。また、本標識薬剤とFabフラグメントを結合させる(以下プローブと 呼ぶ)を作製し、Ga-67あるいCu-64を用いてGa-67標識プローブあるいはCu-64標識プローブを作製した。Cu-64の標識は初めてであったが、酢酸緩衝液を用いることで、効率よく得る事ができた。これらを正常マウスに投与することで、これらの同等性の評価を行ったところ、両標識体は速やかに腎臓からクリアランスされた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の計画通り、制御性T細胞(Treg細胞)に対する抗体のFabフラグメントを作製を行ったところ、これまでの抗体と異なり、プロテインAによる精製が困難であった。分子篩HPLCによる精製に変更することで、目的とするFabフラグメントを得ることができた。抗体FabフラグメントをGa-67およびCu-64 標識するための標識試薬NOTA-MVK-Malの作製を行い、本標識薬剤とFabフラグメントを結合させる(以下プローブ;と 呼ぶ)を作製し、Ga-67あるいCu-64を用いてGa-67標識プローブあるいはCu-64標識プローブを作製した。当初これらの薬剤によりTreg細胞等への影響を検討する予定であったが、核種変更による錯体の電価が異なるなど、Ga-67プローブとCu-64プローブの同等性の評価が新たに必要と考えられた。そこで従来使用していた抗体フラグメントを用い、両標識プローブを作製後、正常マウスに投与した。その結果、腎臓からのクリアランスは同等であり、両標識プローブの同等性が確認された。このように、当初の予定とは少し異なる実験も追加したものの、研究の基礎的な部分は確認できたことから、概ね順調と判断した。

Strategy for Future Research Activity

前年度の検討より、標識プローブの同等性が確認できたことから、Ga-67あるいはCu-64を用いてGa-67標識プローブあるいはCu-64標識プローブを作製後、両放射性核種標識プローブを用いて、マウスTリンパ球に対する結合性、細胞治療に対する評価を行う。同時に肺癌細胞に対する治療効果も検討し、放射線に対する感受性の評価を行う。また、Cu-64標識プローブを正常マウスに投与し、脾臓におけるTreg細胞への影響をIgG抗体と比較する。