2017 Fiscal Year Annual Research Report
脊椎の発生・維持・変性の分子機序解明を目指した統合的研究
| Project/Area Number |
17H04311
|
|---|
| Research Institution | Gunma University |
|---|
Principal Investigator |
筑田 博隆 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (30345219)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 栄 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (50282661)
大島 寧 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (50570016)
松林 嘉孝 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (50747962)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | 整形外科学 / 脊椎脊髄病学 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
変形性腰椎症は変形性膝関節症を上回る膨大な患者数がいるものの、人工膝関節置換術のような長期に安定した治療法はない。分子病態解明、さらには発生学的研究においても、脊椎は四肢関節と比べて大きく立ち遅れている。東京大学医学部整形外科ではマウス変形性腰椎症モデルの開発をおこなってきた。申請者らは、これまで四肢骨格形成や変形性膝関節症の研究で培ってきた技術と経験を基に、脊椎の各組織の発現解析を行い、組織特異的Creマウスや初代細胞培養法など脊椎基礎研究に必要な基盤技術を開発した上で、脊椎の形成、維持、変性を一元的に理解するための統合的研究を計画した。まずレーザーマイクロダイセクションなどを用いた脊椎の発現解析として、硬組織からLMDにて微小組織サンプルを回収し、mRNAを逆転写、増幅してRNAシーケンスを行う手法を転用した（Biomed Res. 35:263-70, 2014）。まず切片作成に十分な大きさとなるE10.5-11.5から、骨格成長が落ち着く生後8wまでのマウスサンプルを時系列に採取し、固定なしに専用コンパウンドに包埋して液体窒素内で急速凍結させ、川本法に準じて凍結切片を作成
したのち、LMDによって各段階の線維輪、髄核、周囲靭帯を切り取った。回収されたサンプルからmRNAを回収し、逆転写、増幅を行ったのちにRNAシーケンスを行い、遺伝子群の発現量とその変化を詳細に解析した。発現遺伝子についてパスウェイ解析を行い、それぞれの組織で重要な役割を果たすであろうシグナル経路の候補を複数得た。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
発現解析などほぼ計画通りに進められている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
前年度実施した正常脊椎の微小発現解析に続き、今年度以降はモデルマウスの変性過程での解析を行い、変性が生じるメカニズムにも迫る。平行して脊椎手術で得られる椎間板や椎体についても発現解析を行う。
|
