2019 Fiscal Year Annual Research Report
Cancer fluid biopsy for childhood malignancies using cell-free nucleotides
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17H05102
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
上田 祐華 広島大学, 病院(医), 講師 (70624641)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 小児がん / リキッドバイオプシー / 遊離DNA / マイクロRNA / 神経芽腫 / 肝芽腫 / 次世代シークエンサー / 遺伝子変化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に引き続き、広島大学小児腫瘍グループに過去約20年間に保存され、予後調査が完了している神経芽腫、肝芽腫、腎芽腫、横紋筋肉腫を含む約1000例のうち、治療前の初代培養にて腫瘍細胞のみ選別され、血漿が同時に保存されている200検体、樹立株23株、腹水・胸水80検体を対象として、昨年度の無治療例（176例）加えて、治療中および再発例を含めた266例を検討した。
1.腫瘍特異的選別マーカーの検出:：既存の細胞株、樹立株の培養液中の遊離核酸およびエクソソームを抽出し、次世代シークエンサー（NGS)を用いて腫瘍特異的な遺伝子変化（変異、欠失、転座）、miRNA発現を検索し、腫瘍に認めた遺伝子変異は98%検出され、またmiRNA発現も特異的なものが認められた。
2.エクソソームの同定と抽出：当大学最新のサーマル電解放出型走査型電顕（日本電子）を用いて、エクソソームのがん細胞表面の局在、培養中の動態、患者血漿中の局在を検討した。血漿・体液（胸水・腹水）や培養液のエクソソームのRNA 量について測定し、miRNAの発現をNGSにて解析し、その結果を見ると腫瘍特異的miRNAの発現が高かった。
3.遊離DNA (cfDNA)抽出：血漿・体液（胸水・腹水）や培養液中のcfDNAを抽出し、定量するとともに、デジタルPCR法で断片化を検索しNGSにて遺伝子変化を測定し、腫瘍DNAの結果との相関を検討した。Cancer Fluid BiopsyとしてのcfDNAでは、生検あるいは摘出されたがん組織の腫瘍細胞そのものの遺伝子変化がほぼ同定された（98％）。一方、miRNAでは一致率が62％前後であり、血漿中miRNAの変化は腫瘍以外の因子の関与が示唆された。
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| Research Progress Status |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Presentation] Late toxicities, especially second malignancies, with GWAS analysis in hepatoblastoma cases treated in the Japanese Study Group for Pediatric Liver Tumor protocol-22019
Author(s)
Hiyama E, Kurihara S, Ueda Y, Hishiki T, Ida K, Iehara T, Oue T, Yano M, Watanabe K, Hoshino K, Ko K, Tanaka Y
Organizer
ASCO Annual Meeting
Int'l Joint Research
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