2019 Fiscal Year Annual Research Report
網羅的解析を用いた、ＫＳＨＶとＥＢＶの溶解感染機構の比較と解明
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17J06368
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
杉本 温子 藤田医科大学, 医学部, 特別研究員(PD)
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| Project Period (FY) |
2017-04-26 – 2021-03-31
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| Keywords | KSHV / ガンマヘルペスウイルス / ユビキチン様タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
KSHV溶解感染機構の解明のためにはKSHVの溶解感染に中心的役割を果たす因子を発見することが急務である。咋年度までの研究において、網羅的探索を行なった結果、潜伏感染細胞と溶解感染細胞で発現が変化する宿主タンパク質を同定し、その中でユビキチン様タンパク質FAT10がKSHV溶解感染に関わる可能性を示した。FAT10に修飾されるウイルスタンパクを探索したところ、8種類のウイルスタンパクが候補としてヒットしてきた。
本年度は、それらのウイルスタンパク質のFAT10への結合解析を行った。特に、ウイルス粒子形成に関わるウイルスタンパクが数種類ヒットしたため、これらについて中心的に解析を行った。候補タンパク質にS-protein-tagを付加し、FAT10発現ベクターと共に293T細胞にトランスフェクションし、プルダウンを行った。その結果、KSHVタンパク質のうち、ORF59、ORF61でFAT10との強い結合が確認された。ORF11に関しては結合が確認されたが、ORF59とORF61に対して弱いと思われた。
さらに、候補ウイルスタンパクとFAT10の局在を観察したところ、ORF59とORF61において核周辺にて一部共局在が見られたため、これらのウイルスタンパクとFAT10がウイルスの粒子形成のために相互作用している可能性が高い。また、これら以外の候補であるウイルスタンパク質について確認を行った結果、ORF47、ORF67について、免疫染色においてはウイルスタンパク質とFAT10の共局在が確認された。しかしながら、プルダウンを行なったところ、結合は確認されなかった。これらのことから、FAT10化されるウイルスタンパク質の候補として、ORF59とORF61があげられる。今後はさらにこれらのウイルスタンパクのKSHV感染においてのFAT10化の意義の解析も行っていきたいと思っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定では、KSHVとEBVの溶解感染で発現しているタンパク質を網羅的解析を用いて比較し、溶解感染機構の差異を解析することで、それぞれの溶解感染機構を明らかにする予定であった。しかし、研究を進めるにあたり、網羅的解析を行なった結果、FAT10という今まで着目されていなかった分子がKSHV溶解感染に深く関わることを発見したため、まず、ユビキチン様タンパク質とヘルペスウイルス溶解感染の相互作用に焦点をあて、溶解感染機構を解明する計画に変更した。結果として、FAT10が修飾するウイルスタンパク質まで同定することができたため、溶解感染機構の解明という点で計画は順調である。これらのウイルスタンパク質はEBVでも高く保存されているため、EBVでもFAT10とも関わりを解明しつつ、当初の予定であったEBVとKSHVの発現タンパク質の比較も行う予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究の最終目標はEBVとKSHVの感染機構を比較し、感染機構の詳細を解明することである。これまでの研究で網羅的探索を行うことでKSHVの溶解感染機構の一端を解明できることが証明された。そこで本年度は、さらに、KSHVと同じくγヘルペスウイルス亜科に属するウイルスであるEBVについても解析を行う。昨年度までの研究中で、EBVの潜伏感染を模倣している細胞である293-EBV BAC細胞を用いて同様にサンプルを作製し、プロテオーム解析を行っている。KSHV ORF61とORF59はγヘルペスウイルス亜科で高く保存されており、発現量が高い。これらのタンパク質もUBLによる修飾を受ける可能性が非常に高い。本年度はその点も解析していきたいと思っている。
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Research Products
(6 results)
