2018 Fiscal Year Research-status Report
人工ユビキチンリガーゼを活用した迅速・高精度なユビキチン化の検出法の開発
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17K05942
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| Research Institution | Himeji Dokkyo University |
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Principal Investigator |
宮本 和英 姫路獨協大学, 薬学部, 准教授 (10415317)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
砂川 真弓 (湯浅真弓) 姫路獨協大学, 薬学部, 助手 (40444509) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | ユビキチン / バイオマーカ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生体内でのタンパク質の品質管理機能を担うユビキチン化は、白血病などのがん疾患と関係が深く、ユビキチン化活性を高感度に検出できれば将来的に疾患の診断・病態把握が可能である。これまでにユビキチン化に関わる酵素であるユビキチンリガーゼ(E3)を人工的に作製し、これを活用することでユビキチン化活性の検出を進めてきた。本申請研究では、簡易検出できる検出システムの構築に向けて、迅速・高精度なイムノクロマトグラフィーで、ユビキチン化活性の検出を検討する。血清サンプルに最適な検出・測定条件を検討し、白血病の診断・病態把握の可能性を調査する。
これまで分子設計技術に基づき(Miyamoto et al, J. Peptide Sci. 2012, Scientific Reports 2014)、急性前骨髄性白血病（APL）に関与する
SIAH-1 活性部位を移植した人工E3 の設計・合成を行ってきた。合成は、Fmoc 固相法で行い、グラジエントHPLC にて精製した。合成確認は、質量分析法(AXIMATOF2,島津製)によって行った。透析操作を経てフォールドさせ、円偏光二色性スペクトルで立体構造の形成を行った。
本年度では、この人工E3を活用したイムノクロマトグラフィー検出を行うために、金コロイドにユビキチン抗体を付加する条件、膜に抗体を塗布する条件など、必要な各種検討を行った。単離精製したE1、E2、ユビキチンおよび人工的なE3 を混合させてユビキチン化を生じさせて、イムノクロマトグラフィーで検出できることが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請で予定していた研究内容は、概ね達成できている
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| Strategy for Future Research Activity |
申請に基づき、我々独自に開発してきた人工的なE3を用いたイムノクロマトグラフィーの検討をがん細胞で行っていく予定である。
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| Causes of Carryover |
理由：予定していたイムノクロマトグラフィー実験試薬にかかる費用の一部を、翌年に変更した。
使用計画：研究試薬等に用いる予定
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