2018 Fiscal Year Research-status Report
核内封入体病においてP小体とストレス顆粒が果たす役割
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17K07088
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| Research Institution | Hirosaki University |
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Principal Investigator |
森 文秋 弘前大学, 医学研究科, 准教授 (60200383)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三木 康生 弘前大学, 医学研究科, 助教 (30709142)
若林 孝一 弘前大学, 医学研究科, 教授 (50240768)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 神経変性疾患 / ポリグルタミン病 / 核内封入体病 / P小体 / ストレス顆粒 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
核内封入体病のmicroRNA解析および病理組織学的検討【対象】核内封入体病において核内封入体ならびに白質病変が高頻度に認められる前頭葉に着目して、核内封入体病（５症例）並びに正常対照（５症例）のパラフィンブロックならびに切片を用いた。【方法】各ブロックからmicroRNAを抽出し、DNAチップ（東レ3D-geneチップ、約1800種のmicroRNAプローブを搭載）でmicroRNAを比較分析した。十分なシグナル強度の遺伝子発現レベルを対象として健常組織に比ベ、発現が増大したmicroRNAと減少したmicroRNAの検出を行った。【結果ならびに考察】microRNAが標的とする数多くの遺伝子群の中から妥当な標的遺伝子の予測をin silico予測ツールとバイオインフォマティクスの手法などを用いて検討し、P小体およびストレス顆粒のマーカーに関連する病態分子の候補を推測した。有望な候補蛋白に対する市販抗体を購入し、候補蛋白に対する抗体を用いて免疫染色を実施し、核内封入体における候補蛋白の発現を検証したところ、いくつかの候補蛋白で陽性所見が得られ、これらの候補蛋白が、核内封入体病の病理発生に重要な役割を果たしていることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
予定していた病態候補遺伝子の推定ならびに病理組織学的検討による核内封入体における局在の証明が滞りなく実施できたので、平成30年度はおおむね実験計画に沿って研究が進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
（１）核内封入体病（INIBD）の核内封入体のレーザー・マイクロダイセクション（LMD）採取および質量分析（MS）【対象】INIBD（n=5）の核内封入体が高頻度に認められる前頭葉のパラフィン切片を用いる。LMD-MSの陰性対照には、同一部位の核内封入体を伴わない神経細胞の細胞核から採集した同体積同数分の組織を用いる。【方法】１）予備的に100～500個相当の陰性対照にLMD-MSを実施し核内封入体採集数を決める。２）LMDで核内封入体と陰性対照を採取(ArcturusXT LCM システム)、抽出した蛋白をトリプシン消化してMSを行い(Thermo LCQ Deca XP Plus)、データベース(Mascot)を利用して候補蛋白を検索する。３）有望な候補蛋白に関して市販抗体を購入する。４）候補蛋白に対する免疫染色を実施し、核内封入体における候補蛋白の発現を検証する。
（２）病態カスケード作成 PB/SG関連蛋白、病態関連分子を組み込んだ新たなINIBDの病態カスケードを作成する。治療の標的となりうる病態関連分子を選定する。
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