2018 Fiscal Year Research-status Report
Project/Area Number |
17K07226
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Research Institution | Showa University |
Principal Investigator |
大場 基 昭和大学, 大学共同利用機関等の部局等, 講師 (70297018)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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Keywords | PKC / 肺がん / 分子標的治療薬 |
Outline of Annual Research Achievements |
2018年度は、以下の2点に関して主に研究を進めた。特にPKCetaの発現抑制による肺がん細胞へのアポトーシス誘導、浸潤・転移の抑制の分子機構が、極めて明確なデータによって証明できた。現在、特許出願と論文の作成を平行して進めている。以下に詳細に記す。
1.PKCeta発現抑制による増殖抑制メカニズムの解明と下流因子の同定 膜トラフィック関連因子に着目し、PKCetaの作用点を明らかとした。この質量分析、特異的リン酸化抗体の作製、及びウエスタンブロッティング解析から、PKCetaのリン酸化基質としてRAB11が同定された。またそのリン酸化部位は新規のアミノ酸残基であった。肺がん細胞では、RAB11の当該サイトがPKCetaによって、特異的にリン酸化されることで、EGFR等、増殖因子受容体がゴルジ体から細胞膜へ効率的に移行することが証明された。 2. 核酸医薬品の探索 PKCetaを標的としたsiRNA医薬品の効果を、マウス腫瘍皮膚移植モデルを用いて検討した。NOD/SCIDマウス背部皮膚に肺がん細胞株PC-9を移植し、PKCeta siRNAをコラーゲンベースのDDS基材を用いることで安定化させ、腫瘍に直接接種した。腫瘍体積はやや減少したものの、統計学的に有意な差は認められなかった。今後は別のDDS基材を用いて、PKCeta siRNAを尾静脈注射することで、全身投与による効果を検討したい。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
PKCetaを発現抑制することで、肺がん細胞の増殖・浸潤・転移が著しく抑制される。その分子機構を極めて明確なデータによって証明できた。PKCの下流因子、即ちリン酸化基質となる蛋白質は極めて多様であり、数多くのリン酸化サイトが存在する。その中で、生物学・生理学的な作用に大きく影響する部位を同定することは、一般に非常に困難である。現在、特許出願と論文の作成を平行して進めているが、この研究を発展させることで、新規分子標的治療薬の開発も視野に入れることが可能になったことは最大の成果と言える。
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Strategy for Future Research Activity |
第1に、発見した分子機構に基づく新規の肺がんの進展・悪性化に関わる分子機構に関する論文を作成する。また、それに先立ち、新規分子標的治療薬の開発につながる知見に関しては、特許出願を行い、将来的な新規分子標的治療薬の探索・同定につなけていきたい。 また、PKCetaに対する特異的阻害剤の探索は網羅的に今後も続けていく予定である。
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Causes of Carryover |
2018年度にRab11蛋白質のリン酸化特異的抗体の作製をSigma Genosys社に依頼した。抗原ペプチド同定・同合成・ウサギ二羽の料金と抗体作製費用・及び抗体の精製に係る総額の発注当初見積額(2018年11月)は税抜きで370000円(税込:399600円)であったが、同抗体の完成と発送・受取時には同社による値引きキャンペーン時期に当たっていたため、税抜き価格が総額17万円であった。そのために差額が大きく生じ、当初の見通しと差額が生じた。 2019年度は、論文投稿料・掲載料・英文校正、更には特許出願に関わる費用が生じる可能性が非常に高い。また国際学会等での発表も想定している。
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[Journal Article] 67.KRAS and EGFR Amplifications Mediate Resistance to Rociletinib and Osimertinib in Acquired Afatinib-Resistant NSCLC Harboring Exon 19 Deletion/T790M in EGFR.2019
Author(s)
Nakatani K, Yamaoka T, Ohba M, Fujita KI, Arata S, Kusumoto S, Taki-Takemoto I, Kamei D, Iwai S, Tsurutani J, Ohmori T.
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Journal Title
Mol Cancer Ther
Volume: 18
Pages: 112-126
DOI
Peer Reviewed
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