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2018 Fiscal Year Research-status Report

PKCetaを分子標的とした新規肺癌治療戦略

Research Project

Project/Area Number 17K07226
Research InstitutionShowa University

Principal Investigator

大場 基  昭和大学, 大学共同利用機関等の部局等, 講師 (70297018)

Project Period (FY) 2017-04-01 – 2020-03-31
KeywordsPKC / 肺がん / 分子標的治療薬
Outline of Annual Research Achievements

2018年度は、以下の2点に関して主に研究を進めた。特にPKCetaの発現抑制による肺がん細胞へのアポトーシス誘導、浸潤・転移の抑制の分子機構が、極めて明確なデータによって証明できた。現在、特許出願と論文の作成を平行して進めている。以下に詳細に記す。

1.PKCeta発現抑制による増殖抑制メカニズムの解明と下流因子の同定
膜トラフィック関連因子に着目し、PKCetaの作用点を明らかとした。この質量分析、特異的リン酸化抗体の作製、及びウエスタンブロッティング解析から、PKCetaのリン酸化基質としてRAB11が同定された。またそのリン酸化部位は新規のアミノ酸残基であった。肺がん細胞では、RAB11の当該サイトがPKCetaによって、特異的にリン酸化されることで、EGFR等、増殖因子受容体がゴルジ体から細胞膜へ効率的に移行することが証明された。
2. 核酸医薬品の探索
PKCetaを標的としたsiRNA医薬品の効果を、マウス腫瘍皮膚移植モデルを用いて検討した。NOD/SCIDマウス背部皮膚に肺がん細胞株PC-9を移植し、PKCeta siRNAをコラーゲンベースのDDS基材を用いることで安定化させ、腫瘍に直接接種した。腫瘍体積はやや減少したものの、統計学的に有意な差は認められなかった。今後は別のDDS基材を用いて、PKCeta siRNAを尾静脈注射することで、全身投与による効果を検討したい。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

PKCetaを発現抑制することで、肺がん細胞の増殖・浸潤・転移が著しく抑制される。その分子機構を極めて明確なデータによって証明できた。PKCの下流因子、即ちリン酸化基質となる蛋白質は極めて多様であり、数多くのリン酸化サイトが存在する。その中で、生物学・生理学的な作用に大きく影響する部位を同定することは、一般に非常に困難である。現在、特許出願と論文の作成を平行して進めているが、この研究を発展させることで、新規分子標的治療薬の開発も視野に入れることが可能になったことは最大の成果と言える。

Strategy for Future Research Activity

第1に、発見した分子機構に基づく新規の肺がんの進展・悪性化に関わる分子機構に関する論文を作成する。また、それに先立ち、新規分子標的治療薬の開発につながる知見に関しては、特許出願を行い、将来的な新規分子標的治療薬の探索・同定につなけていきたい。
また、PKCetaに対する特異的阻害剤の探索は網羅的に今後も続けていく予定である。

Causes of Carryover

2018年度にRab11蛋白質のリン酸化特異的抗体の作製をSigma Genosys社に依頼した。抗原ペプチド同定・同合成・ウサギ二羽の料金と抗体作製費用・及び抗体の精製に係る総額の発注当初見積額(2018年11月)は税抜きで370000円(税込:399600円)であったが、同抗体の完成と発送・受取時には同社による値引きキャンペーン時期に当たっていたため、税抜き価格が総額17万円であった。そのために差額が大きく生じ、当初の見通しと差額が生じた。
2019年度は、論文投稿料・掲載料・英文校正、更には特許出願に関わる費用が生じる可能性が非常に高い。また国際学会等での発表も想定している。

  • Research Products

    (9 results)

All 2019 2018 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (5 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 1 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] 67.KRAS and EGFR Amplifications Mediate Resistance to Rociletinib and Osimertinib in Acquired Afatinib-Resistant NSCLC Harboring Exon 19 Deletion/T790M in EGFR.2019

    • Author(s)
      Nakatani K, Yamaoka T, Ohba M, Fujita KI, Arata S, Kusumoto S, Taki-Takemoto I, Kamei D, Iwai S, Tsurutani J, Ohmori T.
    • Journal Title

      Mol Cancer Ther

      Volume: 18 Pages: 112-126

    • DOI

      10.1158/1535-7163.MCT-18-0591.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Receptor Tyrosine Kinase-Targeted Cancer Therapy.2018

    • Author(s)
      Yamaoka T, Kusumoto S, Ando K, Ohba M, Ohmori T.
    • Journal Title

      Int J Mol Sci.

      Volume: 19(11) Pages: E3491

    • DOI

      10.3390/ijms19113491.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 10-methyl-aplog-1 enhances the cytotoxic effects of HDAC inhibitor in esophageal squamous carcinoma cells2018

    • Author(s)
      OHBA Motoi TOYA Etsuko ARATA Satoru YAMAOKA Toshimitsu IRIE Kazuhiro SASAKI Yasutsuna
    • Organizer
      第16回日本臨床腫瘍学会学術集会
  • [Presentation] Involvement of a cell adhesion molecule, CADM1, in cancer invasion and metastasis2018

    • Author(s)
      村上善則、舩木桐子、坪井裕見、松原大祐、大場基、伊東剛
    • Organizer
      第77回日本癌学会学術総会
    • Invited
  • [Presentation] Screening of metastasis-related genes by microarray analysis of lung cancer cells usisng experimetal lung metastasis2018

    • Author(s)
      熊谷友紀、伊東剛、永田政義、河合剛人、松原大祐、大場基、村上善則
    • Organizer
      第77回日本癌学会学術総会
  • [Presentation] Mechanism of resistance to third-generation EGFR-TKI, rociletinib, in lung adenocarcinoma cells with EGFR-T790M mutation2018

    • Author(s)
      YAMAOKA Toshimitsu NAKATANI Kaori OHBA Motoi FUJITA Ken-ichi ARATA Satoru IWAI Shinichi OHMORI Tohru
    • Organizer
      第77回日本癌学会学術総会
  • [Presentation] Resistance mechanisms to third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors in lung adenocarcinoma cells harboring the EGFR-T790M mutation2018

    • Author(s)
      NAKATANI Kaori YAMAOKA Toshimitsu OHMORI Tohru OHBA Motoi FUJITA Ken-ichi TAKI Iori KAMEI Daisuke IWAI Shinichi SASAKI Yasutsuna
    • Organizer
      18th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology (WCP2018)
    • Int'l Joint Research
  • [Remarks] 昭和大学学術業績リポジトリ

    • URL

      https://meta.lilitory.showa-u.ac.jp/profile/?user_id=fc833fdccdec30c0e08d008b7c17e832b7e3c8d0

  • [Remarks] 昭和大学先端がん治療研究所ホームページ

    • URL

      http://www.showa-u.ac.jp/rsch_acad/act/index.html

URL: 

Published: 2020-03-17  

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