2019 Fiscal Year Research-status Report
Identification of genes specific to the intestinal epithelial stem cells and their functional analysis by making use of transgenic frogs
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17K07475
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
長谷部 孝 日本医科大学, 医学部, 准教授 (70329027)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 上皮幹細胞 / 消化管 / 甲状腺ホルモン / トランスジェネシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
アフリカツメガエル幼生の消化管を構成する上皮細胞は、甲状腺ホルモン(TH)の血中濃度が高まる変態期にそのほとんどが除去されるが、一部が脱分化して成体型上皮幹細胞となる。本研究では、成体型上皮幹細胞特異的に発現する遺伝子の同定と機能解析により、消化管再構築における幹細胞制御のメカニズムを解明することを目的とする。今年度は、(1) 成体型上皮幹細胞の純化のためのトランスジェニック（Tg）カエルの作製、(2) 定量的RT-PCRによるTH応答遺伝子の発現解析を行った。
(1) では、幹細胞特異的に発現するRor2に着目し、Ror2プロモーターにGFPをドライブさせたTgカエルを再度作製した（F1が得られなかったため）。GFPの発現と内在性Ror2の発現が一致することがわかり、本Tgカエルにより上皮幹細胞の標識および単離が可能であることが示された。このように、幹細胞純化に向けた基礎実験では良好な結果が得られつつある。
(2) では、昨年度に引き続き、Hippoシグナルに関与する遺伝子の発現解析を行った。アフリカツメガエルは異質4倍体であるため、同じ遺伝子をほぼ2セットずつ持つ（これらをLホメオログおよびSホメオログという）。Hippoシグナルに関与する遺伝子の各ホメオログの発現解析の結果、同じ機能を担うことが推測されるホメオログ同士でも、異なる発現調節を受けているものがあることがわかった。また、THの受容体であるTRにはαとβの2つのサブタイプが存在するが、このうちTRαが成体型上皮幹細胞ならびにその前駆細胞で特異的に発現することを明らかにした。
本研究により幹細胞特異的な新規遺伝子が同定され、その機能が明らかになれば、幹細胞研究の分野でたいへん意義深いものになることが期待される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
上皮幹細胞およびその前駆細胞の標識に手間取ったため、幹細胞の純化まで至っていないため。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、幹細胞の純化を優先的に行う。その他は計画書通りに実施していく。
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