2018 Fiscal Year Research-status Report
新規ナノ材料を利用した細菌性魚病に有効で実用的な水産用浸漬ナノワクチンの開発
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17K07922
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| Research Institution | Numazu National College of Technology |
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Principal Investigator |
三留 規誉 沼津工業高等専門学校, 物質工学科, 准教授 (90431981)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ナノワクチン / 魚病 / 外膜たんぱく質 / 抗原 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
水産用ワクチンは注射法により個体ごとに接種するものがほとんどであり、一度に数万匹を処理しなければならない養殖場において普及の妨げとなっている。本課題では、キトサンを原料とした新規ナノ材料である中空針状のナノチューブを、浸漬ワクチンのベクターとして利用し、簡易なワクチンデリバリー法を開発するための研究を行う。具体的には、（１）魚のワクチンとなる抗原性タンパク質の調製法の開発、（２）ワクチンベクターのナノチューブの調製法とワクチンの導入法の開発、（３）作製したナノワクチンの評価を行う。これらにより、新規ナノ材料を利用した細菌性魚病に有効で実用的な水産用浸漬ナノワクチンを開発する。
H30年度は、ウナギ、ヒラメ、マダイ、ティラピアなどに感染し、エドワジエラ症を引き起こすEdwardsiella tardaに対するワクチン開発をした。
Edwardsiella tardaを培養し、ホルマリン処理して菌を不活性化したものを注射法ワクチンとした。このワクチン液をシリンジでコイに摂取し、3週間後に採血した。コイの血清中にEdwardsiella tardaに対する抗体があることを、Edwardsiella tardaに対するコイ血清のドットブロッティングで確認した。
次に浸漬法ナノワクチン開発のため、培養Edwardsiella tardaから、外膜タンパク質を精製した。この外膜タンパク質をナノチューブと混合し、凍結乾燥法によりナノチューブ内に外膜タンパク質を導入し、浸漬法ナノワクチンとした。コイの飼育水に浸漬法ナノワクチンを加えコイを10分間浸漬した。3週間後にコイから採血し、外膜タンパク質の抗体ができていることをEdwardsiella tardaの外膜タンパク質に対するウェスタンブロッティングにより確認した。これらの研究成果をTransaction on Gigakuで発表した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画通り、コイの体内で、Edowardsiella taradaに対する注射法ワクチンと浸漬法ナノワクチンの開発に成功し、その研究成果をTransaction on Gigakuで発表した。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究の方策として、③精製した微生物の外膜たんぱく質をナノチューブに導入する方法を確立する。④ナノワクチンの魚への接種と抗体作製の確認を行う。
③の外膜タンパク質の導入方法については、用いるタンパク質の濃度と量、ナノチューブの濃度と量を検討する必要がある。④のナノワクチンの魚への接種は、使用するナノワクチンの濃度、接種する時間、回数を検討する必要がある。
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| Causes of Carryover |
国際学会と国内学会発表を当初の予定と違い、より近郊の場所で国際学会発表と国内学会発表を行ったため、次年度使用額が生じた。翌年度の使用計画は基本的に使用計画通りであるが、生じた次年度使用額は、次年度の学会発表の旅費に充てる。
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