| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、日本における牛寄生Eimeria属原虫の種識別法を開発し、牛コクシジウム症の新たな診断法を確立することを目的とする。今年度は、得られたEimeria種のITS2領域の配列に基づき,Eimeria種特異的なプライマー(alr-1, auf-2, bor-2, bukir-3, car-1, cyf-4, cyr-1, elf-1, suf-2, sur-1, wyf-2, wyr-3, zuf-2)を設計した. また, 18S rDNA領域の配列を解析し、Isospora belli(DQ060658), cryptospor-idium purvum(AF040725)の配列より設計したEimeria属共通のプライマーespfおよびespfzを設計した. espfおよびespfzを 1st PCRのプライマーとし、alr-1, auf-2, bor-2, bukir-3, car-1, cyf-4, cyr-1, elf-1, suf-2, sur-1, wyf-2, wyr-3, zuf-2を2nd PCRのプライマーとして組み合わせることで、Eimeria種特異的なnested multiplex PCR法の開発を試みた。Eimeria各種のオーシストから抽出したtotal DNAを用いて種特異的増幅産物が得られたことから、日本における牛寄生Eimeria属原虫の種を識別する簡便なnested multiplex PCR法の開発に成功した。次年度は新規開発したnested multiplex PCR法の臨床応用を検討することとした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
日本に分布する牛寄生Eimeria10種（E. bovis, E. ellipsoidalis, E. zuernii, E. auburnensis, E. cylindrica, E. canadensis, E. wyomingensis, E. alabamensis, E. bukidnonensis, E. subspherica）のオーシストから抽出した全DNAを用いて、開発したnested multiplex PCR法が特異的増幅することを確認できたため。
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