2018 Fiscal Year Research-status Report
レストンエボラウイルス感染実態の解明を目指した新たな基盤技術の創出
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17K08091
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
福士 秀悦 国立感染症研究所, ウイルス第一部, 室長 (80373398)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | レストンエボラウイルス / モノクローナル抗体 / ウイルス感染症 / 血清診断 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、カニクイザルにおけるレストンエボラウイルス(REBOV)感染実態を解明するための新たな基盤技術の確立を目指す。サルにおけるREBOV感染症はフィリピンで2015年に19年ぶりに発生し、今後も散発的に発生する可能性があることから、REBOVのスクリーニング方法を確立する必要がある。そこで、リアルタイムPCRによるREBOV特異的遺伝子検出系、REBOVに対するモノクローナル抗体を用いたREBOV特異的抗体検出系の開発を行う。2017年度までにリアルタイムPCRによるREBOV特異的遺伝子検出系を開発した。2018年度は本手法を用いてフィリピンのREBOV感染サル検体からの遺伝子検出を行い、従来のコンベンショナルPCRと同等の結果が得られた。
また、REBOVのGPを哺乳細胞で発現させた。精製したリコンビナントREBOV GPをマウスに免疫し、モノクローナル抗体の作製を試みたが、REBOV GP特異的なクローンは得られなかった。今後はGPに対するモノクローナル抗体を得るための抗原調製方法を変更し、ウイルスベクターを用いたREBOV GPの発現系を検討することとした。
一方、REBOV NPに対するモノクローナル抗体をハイブリドーマから精製した。この精製NP抗体を競合ELISAに用いた。各種ウイルスNPを免役したウサギ血清を用いて検討したところ、競合ELISAにより抗REBOV NP抗体を特異的に検出できることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
REBOVの遺伝子検出系、およびNPに対するモノクローナル抗体を用いた抗体検出系は順調に開発できた。GPに対するモノクローナル抗体調製は継続して行う。
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| Strategy for Future Research Activity |
REBOVのGPを哺乳細胞で発現・精製し、マウスに免疫し、モノクローナル抗体の作製を試みたが、REBOVのGP特異的なクローンは得られなかった。今後はウイルスベクターを用いたREBOV GPの発現系を確立し、GPに対するモノクローナル抗体を得るための免疫原となるかどうか検討する。NPに対するモノクローナル抗体を用いた抗体検出系により、サル血清からのREBOV抗体検出が可能か検討する。
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| Causes of Carryover |
年度末納品等にかかる支払いが平成31年4月1日以降となったため。
当該支出分については次年度の実支出額に計上予定であるが、平成30年度分についてはほぼ使用済みである。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Reemergence of Reston ebolavirus in Cynomolgus Monkeys, the Philippines, 2015.2018
Author(s)
Demetria C, Smith I, Tan T, Villarico D, Simon EM, Centeno R, Tachedjian M, Taniguchi S, Shimojima M, Miranda NLJ, Miranda ME, Rondina MMR, Capistrano R, Tandoc A 3rd, Marsh G, Eagles D, Cruz R, Fukushi S.
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Journal Title
Emerg Infect Dis.
Volume: 24
Pages: 1285-1291
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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