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2017 Fiscal Year Research-status Report

アセチルCoAを接点としたグルコース代謝とFOXO1アセチル化の制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 17K08193
Research InstitutionUniversity of Tsukuba

Principal Investigator

大徳 浩照  筑波大学, 生命領域学際研究センター, 講師 (30361314)

Project Period (FY) 2017-04-01 – 2020-03-31
Keywords転写因子 / アセチル化 / 寿命
Outline of Annual Research Achievements

血糖値の恒常性や寿命調節の鍵となる転写因子FOXO1は、リン酸化に加えてアセチル化制御を受けることが知られていたが、アセチル化修飾のトリガーとなる生理的条件は長年不明であった。本研究では、「過剰なグルコース代謝が細胞内のアセチルCoA量を上昇させることでFOXO1のアセチル化を亢進する」という新たなメカニズムを提唱し、培養細胞、線虫、マウスを用いたin vitro、in vivoの両面から解析を進める。平成29年度の研究実績は以下の通りである。
1. 哺乳類細胞を高グルコース培地で培養したところ、FOXO1アセチル化の亢進が認められ、解糖系を阻害するとアセチル化は抑制された。また、この効果はATP-クエン酸リアーゼであるACLに依存していた。
2. 線虫をグルコース添加培地で飼育したところ、DAF-16のアセチル化の亢進が認められた。独自に開発したin vivo DAF-16活性評価系を用いて検証した結果、グルコース添加培地ではDAF-16の転写活性は抑制されていた。一方で、DAF-16の細胞内局在に変化は見られなかったことから、リン酸化以外のメカニズムが示唆された。
3. 長寿変異体daf-2の寿命は、グルコース添加培地で飼育することで短縮した。この時、ACLの線虫オルソログであるacly-1とacly-2をそれぞれノックダウンして寿命延長がみられるか検証したが、少なくとも単独のノックダウンでは変化は見られなかった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

培養細胞を用いた高グルコース培地でのFOXO1のアセチル化の解析は当初の計画通り進んでおり、線虫個体におけるグルコースと老化の関係も実証できている。現在、クエン酸からアセチルCoAを合成する酵素のノックダウンが寿命にどのような影響を与えるか検証しているが、同酵素が複数存在するため、やや難航している。

Strategy for Future Research Activity

培養細胞の系では、高グルコース条件がアセチルCoA量の上昇に結びつくことをLC-MSによって実証する。
線虫では、グルコースの老化促進作用がDAF-16のアセチル化に起因するか否かを、分子遺伝学的解析によって検証する。また老化の指標として、寿命測定に加えて運動量なども測定する。

Causes of Carryover

消耗品や試薬についてコスト管理を徹底したことで、線虫の維持にかかる費用を大幅に削減できた。
繰り越し分で、アセチル化タンパクの免疫沈降に必要な抗体を新たに購入する。

  • Research Products

    (4 results)

All 2018 2017

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] The GATA transcription factor ELT-2 modulates both the expression and methyltransferase activity of PRMT-1 in Caenorhabditis elegans2018

    • Author(s)
      Araoi S, Daitoku H, Yokoyama A, Kako K, Hirota K and Fukamizu A.
    • Journal Title

      Journal of Biochemistry

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1093/jb/mvy012

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Asymmetric Arginine Dimethylation Modulates Mitochondrial Energy Metabolism and Homeostasis in Caenorhabditis elegans2017

    • Author(s)
      Sha L, Daitoku H, Araoi S, Kaneko Y, Takahashi Y, Kako K, and Fukamizu A.
    • Journal Title

      Molecular Cellular Biology

      Volume: 37 Pages: e00504-00516

    • DOI

      10.1128/MCB.00504-16

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Simultaneous ablation of prmt-1 and prmt-5 abolishes asymmetric and symmetric arginine dimethylations in Caenorhabditis elegans2017

    • Author(s)
      Hirota K, Shigekawa C, Araoi S, Sha L, Inagawa T, Kanou A, Kako K, Daitoku H, and Fukamizu A.
    • Journal Title

      Journal of Biochemistry

      Volume: 161 Pages: 521-527

    • DOI

      10.1093/jb/mvw101

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 線虫C. elegansにおける転写因子DAF-16の活性化に働く熱センサーの同定2017

    • Author(s)
      新生翔、大徳浩照、金子悠太、深水昭吉
    • Organizer
      生命科学系学会合同年次大会

URL: 

Published: 2018-12-17  

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