Outline of Annual Research Achievements |
最終年度である本年度においては, まず, 昨年度に作製したハイドロキシウレア(HU)生産用大腸菌(dcsA, dcsB, および, ホウレン草由来のフェレドキシンおよびフェレドキシン還元酵素をコードする遺伝子を導入した大腸菌)を用いて, HU生産実験を行った。しかしながら, 種々の生産条件を試したものの, HU生産は認められなかった。この原因として, ホウレン草由来のフェレドキシンおよびフェレドキシン還元酵素は, DcsAの電子伝達系として機能するものの, 活性が微弱なため, DcsAによる十分なアルギニン水酸化が起こらなかったためではないかと考えられた。大腸菌を宿主としたHU生産システムの構築が達成できなかったため, L-セリンおよびL-アルギニンを原料とした大腸菌によるD-サイクロセリン(D-CS)生産研究は実施できなかった。 D-CS生産放線菌であるStreptomyces lavendulae ATCC11924においては, DcsAの電子伝達系が必ず存在するはずである。そこで, ATCC11924株のゲノム解析を実施し, DcsAの電子伝達系をコードする遺伝子の探索を行った。ゲノム解析の結果, 3つのコンティグ(総計8.06 Mb)が得られ, 7,235個のコーディングシークエンス(CDS)が存在することが推定された。CDSの詳細な解析の結果, フェレドキシンの候補遺伝子を8個, および, フェレドキシン還元酵素の候補遺伝子を4個見出すことができた。 研究期間全体を通して, ATP再生系付与によるD-CS生産性の向上を達成することができ, また, ATCC11924株のゲノム解析により, フェレドキシン, および, フェレドキシン還元酵素の候補遺伝子を見出すことができた。
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