2018 Fiscal Year Research-status Report
Analysis on the expression of protein regulating pharmacokinetics via oxidative stress-response lncRNA
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17K08411
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
池村 健治 三重大学, 医学部附属病院, 薬剤師 (70513935)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥田 真弘 三重大学, 医学部附属病院, 教授 (70252426)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Long non-coding RNA / microRNA / microRNA-sponge / 酸化ストレス / P-糖タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Long non-coding RNA(lncRNA)は、さまざまな生命現象への関与が明らかとなり、新たな制御因子として注目され、酸化ストレス時にその発現が変動することが知られている。近年、薬物代謝酵素・薬物トランスポーターの発現調節におけるlncRNAの関与が指摘されており、lncRNAの発現変動が薬物体内動態の個体内・個体間変動の一因となる可能性が考えられる。本研究では、酸化ストレス応答性lncRNAを介した薬物代謝酵素・薬物トランスポータの発現調節機構と薬物体内動態変動におけるlncRNAの役割について検討を行った。
昨年度までに、酸化ストレス曝露後に薬物トランスポータの1種であるP-糖タンパク質(P-gp)の発現量が上昇することを明らかにした。本年度では、酸化ストレスを介したP-gp（MDR1）の発現量及び機能変動に及ぼすlncRNAの役割について検討を行った。In vitro 及びin silico解析の結果より、MDR1の発現調節に関与しうるlncRNAを同定した。同定したlncRNAは、microRNA spongeと呼ばれるmicroRNAとの相互作用によって、MDR1のmRNA発現量を間接的に制御する可能性を見出した。現在、ヒト結腸由来の培養腸上皮細胞Caco-2細胞を用い、同定したlncRNAによるMDR1の発現制御に関する詳細なメカニズムについて検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
MDR1の発現制御に関わるlncRNAが多数存在し、標的lncRNAを同定するのに時間を要したことにより、研究にやや遅れが生じた。
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| Strategy for Future Research Activity |
培養細胞に酸化ストレスを暴露させ、同定した標的lncRNAとの関連性について検討する。また、ヒト結腸由来の培養腸上皮細胞Caco-2細胞を使用し、siRNAを用いて同定した標的lncRNAを特異的にノックダウンさせ、細胞からTotal RNA及びタンパク質を抽出し、RT-PCR及びWestern Blot解析によりMDR1のmRNA及びタンパク発現量を測定する。さらに、標的lncRNAをノックダウンさせた細胞を使用し、結合配列を持つmicroRNA mimicを用い、MDR1のmRNA発現量をRT-PCRにより測定する。さらにRNA免疫沈降法により、lncRNAとmicroRNAの相互作用を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
マイクロアレイ解析によるMDR1の発現制御に関わるlncRNAの同定を予定していたが、in silico解析を先行させ、標的lncRNAの同定を行ったため、未使用額が生じた。このため、同定したlncRNAによるMDR1の発現制御に関する詳細なメカニズム解明を目的としたin vitro実験に必要な試薬等にその経費を充てることとする。
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[Journal Article] Tadalafil treatment in mice for preeclampsia with fetal growth restriction has neuro-benefic effects in offspring through modulating prenatal hypoxic conditions.2019
Author(s)
Tachibana Ryota, Umekawa Takashi, Yoshikawa Kento, Owa Takao, Magawa Shoichi, Furuhashi Fumi, Tsuji Makoto, Maki Shintaro, Shimada Kyoko, Kaneda K. Michiko, Nii Masafumi, Tanaka Hiroaki, Tanaka Kayo, Kamimoto Yuki, Kondo Eiji, Kato Ineko, Ikemura Kenji, Okuda Masahiro, et al.
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 9
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Oxidative DNA Damage Induced by Pirarubicin, an Anthracycline Anticancer Agent, in the Presence of Copper(II)2018
Author(s)
Mizutani Hideki, Nishimoto Ayano, Hotta Saki, Ikemura Kenji, Imai Masanori, Miyazawa Daisuke, Ohta Kinya, Ikeda Yoshiaki, Maeda Tohru, Yoshikawa Masae, Hiraku Yusuke, Kawanishi Sshosuke
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Journal Title
Anticancer Research
Volume: 38
Pages: 2643～2648
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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