2020 Fiscal Year Annual Research Report
Mechanism of cell death suppression by Ptch1 and XIAP during mouse embryogenesis
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17K08513
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
青戸 一司 浜松医科大学, 医学部, 助教 (60360476)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ソニックヘッジホッグ(Shh)シグナル伝達経路 / patched1 / 脳神経管の細胞死抑制 / CRISPR-Cas9法 / GONAD法 / XIAP / エレクトロポレーション / 変異マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、マウス個体発生におけるPatched1(Ptch1)のC末端と、結合タンパク質X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP)などによる細胞死抑制機構の生理的役割の解明を目的とする。
具体的には、１）CRISPR-Cas9法によってPtch1-CのXIAP結合部位の変異マウスを作製し、個体発生におけるPtch1-XIAPによる細胞死抑制の生理的役割とその分子メカニズムを解明する、
２）Ptch1とXIAPへのタグノックインマウスを作製し、Ptch1とXIAPの線毛での局在変化を明らかにすることを目的としている。平成３０年度、令和元年度は、迅速に変異マウスを作製する法として、妊娠が確定した雌マウスの卵管膨大部にCRISPR-Cas9の溶液を注入し、エレクトロポレーションによって受精卵のゲノムに変異を与える方法（GONAD法）により作製したPtch1のC末端のXIAPの結合部位欠損マウス（Ptch1-dIBS）、Ptch1のC末端への2xHAタグ挿入マウス（Ptch1-2xHA）の交配による個体数の増加と、ホモ変異体の経過観察を行った。しかしながら、Ptch1-dIBSのホモ変異体マウスでは月齢が半年以上経過しても、Ptch1のヘテロノックアウトマウスの30%に見られる皮膚、脳グリア、筋肉などにみられる癌化は観察されなかった。一方で、初期にPtch1-2xHAホモ変異体では出生後に致死になる仔マウスが観察されたが、現在はホモ個体が生まれてきている。Ptch1の局在変化を観察したところ、HA抗体により線毛での局在変化を明らかにすることができた。
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Research Products
(3 results)
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[Journal Article] ATP6V0A1 encoding the a1-subunit of the V0 domain of vacuolar H+-ATPases is essential for brain development in humans and mice2021
Author(s)
Aoto K., Kato M., Akita T., Nakashima M., Mutoh H., Akasaka N., Tohyama J., Nomura Y., Hoshino K., Ago Y., Tanaka R., Epstein O., Ben-Haim R., Heyman E., Miyazaki T., Belal H., Takabayashi S., Ohba C., Takata A., Mizuguchi T., Miyatake S., Miyake N., Fukuda A., Matsumoto N., and Saitsu H
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 12
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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