2017 Fiscal Year Research-status Report
マクロファージ機能極性を制御するスフィンゴ脂質シグナリング
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17K08542
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| Research Institution | Ishikawa Prefectural Nursing University |
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Principal Investigator |
多久和 典子 石川県立看護大学, 看護学部, 教授 (70150290)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | マクロファージ / 脂質メディエーター / 細胞系譜特異的遺伝子改変マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
S1P2遺伝子(S1pr2)上のエクソン2のコーディング領域の両端にloxP配列を挿入したS1pr2-floxedマウス(S1P2flox/flox)とマクロファージ（Mph）特異的Cre発現ノックインマウス(LysM-Cre)を交配し，Mph特異的S1P2ノックアウトマウス(S1P2flox/flox ; LysM-Cre)を得た。また， Rosa26-tdTomato(tdTomato)マウスをLysM-Creマウスと交配し，LysM-Cre ; tdTomatoマウスを得た。LysM-Cre;tdTomatoマウスでは，気管支肺胞洗浄液中のtdTomato遺伝子発現細胞は全てMac3が陽性であった。一方，Mac3陰性の細胞は，tdTomato遺伝子を発現していなかった。これらのことから，LysM-Creマウスでは、Lysosome特異的に効率よくflox配列を有する遺伝子が欠失することを確認した。
S1P2flox/flox ; LysM-CreマウスにおいてMphのS1pr2がノックアウトされているか否かをqPCRにより検討したところ、LS1P2flox/flox ; LysM-Creマウスでは気管支肺胞洗浄液中のMphおよび腹腔MphのS1pr2 mRNA発現は95 %低下しており、S1pr1及び S1pr4 mRNAは低下していなかった。したがって，Mphにおいて，S1pr2 mRNAの発現が選択的に抑制されていることを確認した。
S1P2flox/flox ; LysM-Creマウス及び同腹S1P2flox/floxマウス（コントロールマウス）にブレオマイシン負荷による肺線維症モデルを作成し、Mph特異的S1P2ノックアウトの影響を解析した。S1P2flox/flox ; LysM-Creマウスにおいて気管支肺胞洗浄液中のマクロファージ数はコントロールマウスと有意差なく、肺線維症の増悪を認めた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の目的どおりの細胞系譜特異的遺伝子改変マウスを得た。さらにブレオマイシン負荷による肺線維症モデルを作成し、検討を開始している。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画に則ってマウス個体および気管支肺胞洗浄液から得たMphを用いた培養細胞系での検討を進める。
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| Causes of Carryover |
技術的な問題で研究の進捗が予想よりも遅延したため、次年度使用額が発生した。問題が解決したので、次年度において遅延分を取り戻す研究推進を目指す。
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Research Products
(6 results)
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[Journal Article] Augmented sphingosine 1 phosphate receptor-1 signaling in cardiac fibroblasts induces cardiac hypertrophy and fibrosis through angiotensin II and interleukin-6.2017
Author(s)
Ohkura SI, Usui S, Takashima SI, Takuwa N, Yoshioka K, Okamoto Y, Inagaki Y, Sugimoto N, Kitano T, Takamura M, Wada T, Kaneko S, Takuwa Y.
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Journal Title
PLoS One.
Volume: 12
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Myotubularin-related protein 4 (MTMR4), a phosphoinositide 3'-phosphatase, regulates endolysosome integrity and autophagy flux in human lung alveolar epithelial A549 cells.2017
Author(s)
PQ Hoa, K Yoshioka, SK Azadul, AT Khin, S Islam, S Aki, S Nakamura, N Takuwa, Y Takuwa.
Organizer
第40回日本分子生物学会年会
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[Presentation] Myotubularin-related protein 4 (MTMR4), a phosphoinositide 3'-phosphatase, regulates endolysosome integrity and autophagy flux in human lung alveolar epithelial A549 cells.2017
Author(s)
PQ Hoa, K Yoshioka, SK Azadul, AT Khin, S Islam, S Aki, S Nakamura, N Takuwa, Y Takuwa.
Organizer
第 95 回日本生理学会大会
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