2017 Fiscal Year Research-status Report
膜結合型コレクチンCL-P1による新規補体活性化メカニズムの解明
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17K08615
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| Research Institution | Asahikawa Medical College |
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Principal Investigator |
大谷 克城 旭川医科大学, 医学部, 准教授 (90396367)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 補体 / コレクチン / スカベンジャー受容体 / 血管障害 / 免疫学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は、CL-P1を介した新たな経路を含めて宿主に対する補体活性化メカニズムを、野生型マウスを用いてin vivoで証明を試みた。先ず、生体においてCL-P1に急性炎症マーカーCRP、補体因子C1qが結合して補体経路が活性化し、膜障害性複合体を形成することを確認した。これはin vitroで見出したCL-P1による新規の補体活性化経路をマウスを用いてin vivoで証明する取り組みである。当初CL-P1 TGマウスを作製し、両者で証明を進めることも想定していたが、TGマウスを作製せず野生型マウスでのみ行った。確認は、補体活性化経路を、「C3ステップ」と「MAC形成ステップ」に分け、今年度は「C3ステップ」について行った。
CL-P1依存的に「C3ステップ」まで活性化は進むかについての証明は、野生型マウス（C57BL/6マウス）にCRPを接種し、抗CL-P1、CRP、C1q抗体を用いて蛍光免疫染色を行い、蛍光顕微鏡にて共局在を確認した。CRP の濃度依存性を想定し、いくつかの濃度で接種し、濃度依存性を確認した。実際にはCRP接種後のマウス組織切片を作成して上記因子に対する抗体で確認を行った。さらに詳細に局在について確認を行うため、金コロイド標識・蛍光標識抗体を用いて蛍光顕微鏡観察画像と電子顕微鏡画像を重ね合わせて共局在を証明するための予備実験を進めた。
CL-P1を介したCRP、C1qによる補体活性化については「C3ステップ」までは検証作業が必要であるが結果をえることができた。この取り組みによりin vitroだけでなく、生体でも同様の現象が起こることを証明することができると考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は、マウスにおける急性期炎症マーカーは同じペントラキシンファミリーのSAPが担っているとの報告から、ペントラキシンファミリーのSAPおよびPTX3がCRP同様に機能することについて、SAPを用いて同様の検討を行う予定であったが、CRPでの検討に想定以上の時間を要したため、そこまで検討を遂行することができなかった。
次年度は、この取り組みについても行っていく予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
先ずCL-P1を介したCRP、C1qによる補体活性化については「C3ステップ」までについて最終検証を行う。さらに、前年度予定していたペントラキシンファミリーのSAPおよびPTX3がCRP同様に機能するかついて検討を行う。
上記検討を行うと共に、当初予定の平成30年度の研究実施計画を遂行する。
補体制御因子Factor Hノックアウト（CFH KO）マウスを用いて、CL-P1による補体活性化が「MAC形成ステップ」において細胞障害を引き起こすかについて証明を行い、CFH KOマウスを用いてCRPの接種により細胞障害がおこるか確認する。
CFH KOマウスとCL-P1 TGマウスの交配により、血管障害モデルマウスの作製を試み、メカニズムの解明のための準備を進める。前年度の計画の一部の実験と並行して進めるが、順調に進展した場合は、当初の計画通り様々なCRP濃度での1回接種または一定のCRP濃度の維持投与を行い、状況の推移を観察し、発症に繋がる現象を、炎症マーカーや組織標本の蛍光免疫染色によりメカニズムの解明を進める。
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| Causes of Carryover |
当初予定していた計画の、最初の課題（CRPを用いた検討）の実験に時間を要し、この結果を受けて進める予定の実験（SAPおよびPTX3を用いた検討）が、今年度実施できなかったため、次年度最初に実験計画を移行して行う予定である。
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Research Products
(5 results)
