2019 Fiscal Year Research-status Report
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17K08648
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
白木原 琢哉 北里大学, 医学部, 助教 (30548756)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | リン酸化タンパク質 / EMT |
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| Outline of Annual Research Achievements |
TGF-βによって誘導されるEMT（上皮間葉移行）の形態変化や細胞運動能をFGFシグナルが増強するeEMT（enhanced-EMT）と名付けた現象に関与するチロシンリン酸化シグナルの解析を行っている。
今年度は前年度までの網羅的探索によって同定された約550のリン酸化タンパク質の候補から、eEMT誘導や特徴に密接に関わるリン酸化修飾の絞り込みを行った。その１つ目の方法として、候補リン酸化タンパク質を標的とするshRNAを設計してNMuMG細胞へ導入し、TGF-βとFGF-2共刺激によるeEMT誘導への影響を観察した。今年度までに約30の遺伝子に対するshRNAを導入したが、まだ目的とするeEMT抑制効果がはっきりとは認められるものは見出だせていない。さらに、候補タンパク質中に含まれるキナーゼなどの酵素活性を有するタンパク質には阻害剤が存在するものもあったため、２つ目の方法として特定の阻害剤投与によるeEMT阻害効果を検証した。今年度は3種類の阻害剤を投与したが、それらにはeEMTを阻害する効果は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
質量分析によるリン酸化タンパク質のスクリーニングは計画通り完了しているが、その後の目的タンパク質の絞り込みが予定通りに進まなかった。有力候補を順次ノックダウンした細胞株を用意したが、それらはeEMT誘導を抑制しなかったため、今年度行う予定であった機能解析や論文投稿には間に合っていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
本申請の予定研究期間は過ぎたが、質量分析から同定された候補タンパク質はまだ多数残っているため、引き続き機能によるshRNAや阻害剤による絞り込みを継続していく。阻害剤投与実験も引き続き進行させる。eEMT誘導に関与するリン酸化タンパク質を見出したら、速やかに論文投稿の準備に取り掛かる予定である。
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| Causes of Carryover |
当初計画で予定していた新規タンパク質の絞り込みが難航しており、論文の執筆が補助事業期間中には間に合わないため。EMT誘導を促進する主要な候補として考えていたタンパク質が様々な解析結果から陰性であることが明らかとなり、研究計画を遡っているために想定以上に時間を要している。
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