2018 Fiscal Year Research-status Report
Phosphorylation of Y14 mutated in TAR syndrome
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17K08677
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
石垣 靖人 金沢医科大学, 総合医学研究所, 教授 (20232275)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大塚 哲 金沢医科大学, 総合医学研究所, 准教授 (40360515)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Y14(RBM8A) / リン酸化 / mRNA / EJC / Magoh |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Y14(RBM8A)遺伝子の発現低下は、橈骨欠損血小板減少症（TAR症候群)の原因として知られている。この遺伝子がコードするタンパク質は、中央領域に保存されたRNA認識モチーフを、そしてＮ末端に核局在化シグナルを持っている。Y14は、他の因子とともにスプライシングと共にmRNA分子上に形成されるExon Junction 複合体の一員である。本研究では、特にY14に存在する２カ所のセリンのリン酸化制御を中心として成果を発表してきたが (Scientific Reports, 2018)、2018年度は、Y14と細胞内で安定に結合してヘテロダイマーを形成するMagohについても解析を行ない、両者の複合体形成がそれぞれのタンパク質レベルでの安定性に寄与していることを明らかにすることができた。この結果は、2013年に申請者がExperimental Biology and Medicine誌において報告した、培養細胞におけるノックダウン実験の結果ともよく一致した。研究の成果はBiochemical and Biophysical Research Communications誌に発表できた。また、Y 14の局在解析を電子顕微鏡レベルで実施していることで、mRNA結合因子Upf2との共局在からmRNAの構造を観察する手法を提案し、Microscopy Research and Technique (MRT)誌に公表することができた。さらに、リン酸化変異体の発現が腫瘍の悪性化に関与する可能性を薬剤誘導系の構築とともに進めており、今後解析を進めて行く予定である。また、マウスを用いたインビボでの変異体作成も進行中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Y14の細胞内制御の解析については概ね順調に進展している。さらにリン酸化の意義については細胞内局在について解析を進め、特に免疫電顕の手法を発展させて細胞内オルガネラにおける局在を詳細に解析している。また、生理学的な意義の解析には変異体の発現系構築が重要であり、薬剤誘導系を構築して腫瘍の悪性化への関与を検討している。以上のように動物モデルでの解析も含めて順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、予定通り以下の２点について検討を進める。第１にリン酸化の役割をインビボで解明するために、リン酸化変異マウス作製を進めるとともに、リン酸化部位に変異を持つ細胞系を構築する。第２に、リン酸化変異体発現の影響をヒト培養細胞内で分子レベルにて解析することによりリン酸化の持つ細胞内機能を明らかにする。以上よりY14のリン酸化制御について生体内での役割や病態への関与について新たな知見を加え、この研究の出発点である、Y14がどうしてリン酸化を受ける必要があるのかを明らかにしていきたい。
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