2019 Fiscal Year Annual Research Report
Phosphorylation of Y14 mutated in TAR syndrome
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17K08677
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
石垣 靖人 金沢医科大学, 総合医学研究所, 教授 (20232275)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大塚 哲 金沢医科大学, 総合医学研究所, 准教授 (40360515)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Y14 / リン酸化 / ゲノム編集 / 核小体 / Magoh |
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| Outline of Annual Research Achievements |
TAR症候群(Thrombocytopenia- absent radius syndrome)は、血小板減少と橈骨の欠損を特徴とする劣性の遺伝疾患である。原因遺伝子はY14(RBM8A)と呼ばれるRNA結合因子であるが、従来のノックダウン、ノックアウト系では細胞死が誘導され発症の分子機序を解くことは困難である。研究代表者は核質のY14がリン酸化を受けることで、リボソーム合成の場である核小体への誤ったmRNA集積を防いでいる新知見を得てきた。この発見を更に発展させ、核小体での解析からY14のリン酸化が生体にどのように寄与するのかを分子、細胞、個体レベルで明らかにしていきたい。これにより、Y14のかかわる生命現象に新しい知見を加え、TAR症候群や橈骨欠損、血小板減少症の解明や治療に貢献することが本研究の目的である。このため、インビボモデルでの解析は必須であり、マウス個体におけるリン酸化の役割を解析するために、変異マウスの作出を試みた。ES細胞における遺伝子組換えによるマウス作製の進捗が捗らなかったために、ゲノム編集によるゲノム配列の改変を試みた。Y14自体の欠損はマウス胎生致死であることを明らかにしていたので、ノックアウトして発現ベクターによりレスキューする系の構築は困難であった。このため、２カ所の標的配列を近傍に設定し、切断を入れた後に変異配列を持つオリゴDNAを受精卵へ導入し、相同組換えを起こさせることで、リン酸化セリンをアラニンへ変換することを試みた。作成した受精卵を仮親へ導入して生まれた5匹のうち3匹が変異ホモ個体であった。現在、ここから繁殖させ、経過を観察した。以上より、Y14タンパク質のリン酸化について、細胞レベルおよびマウス個体レベルでの解析系を構築し、特に細胞内での局在に関わる機序を明らかにすることができた。
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