2018 Fiscal Year Research-status Report
細胞移植における免疫制御機構と肝再生促進機序の解析
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17K08765
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
市戸 義久 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (80452978)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 肝幹・前駆細胞 / 骨髄間葉系細胞 / 細胞移植 / Extracellular vesicles / 肝再生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者はこれまでに、障害肝由来Thy1陽性間葉系細胞（Thy１）と骨髄由来間葉系細胞(BM-MCs)が分泌する細胞外小胞(Extracellular Vesicles: EVs)の中に、肝前駆細胞の増殖を促進する因子が含まれていることを見出した。今回、 Retrorsine/部分肝切除(Ret/PH)モデルにKupffer細胞活性を抑制する塩化ガドリニウム(Gd)を投与し、Thy1とBM-MCs移植によるSHPCsの挙動を検討した。結果、Gd投与によりThy1移植群ではSHPCsは縮小し、BM-MCs移植群ではSHPCsが増大した。このことから、Thy1移植群では移植早期のKupffer細胞の活性化が重要で、IL17RBシグナルを介してSHPCsの増殖を促進しているのに対し、BM-MCsではKupffer細胞は関与せず、BM-MCsが分泌する液性因子が直接SHPCsの増殖を促進している可能性が示唆された。そこで、EVsの中からBM-MCs特異的な因子の同定を試みた。miRNA マイクロアレイの解析結果から、6種を抽出し、次にRealtime PCRにて発現量を確認し、４種に絞った。この４種のmiRNAのmimicを、肝前駆細胞の１つである小型肝細胞(Small Hepatocytes; SH)に導入し、増殖能を検討し、1因子を同定した。今後は増殖シグナルの解析のほか、EVsに含まれるタンパク質をサイトカインアレイにて解析し、増殖促進因子の同定を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Kupffer細胞活性を抑制する塩化ガドリニウム投与実験により、BM-MCsではKupffer細胞は関与せず、液性因子による直接的な促進効果が重要で、その因子を１つ同定できたことから、本研究は着実に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
① 同定した1因子の増殖促進の分子メカニズムを解析する
② 他の肝再生因子、特にBM-MCsに特異的な因子を次はサイトカインアレイ解析により同定する。
③ 類洞内皮細胞やKupffer細胞、Pit細胞を活性化するか、検討する。
以上の解析から同定した因子を、in vivo実験としてRet/PHモデルに投与し、内在性SHPCsを増大するか検討していく。
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| Causes of Carryover |
本研究には候補因子の分子メカニズムの解析が必要であり、解析に必要な額を留保したため、次年度使用額が生じている。
次年度使用額は、受諾解析費用、試薬、及び実験動物や実験器具などの消耗品の購入に用いる。
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