2019 Fiscal Year Research-status Report
HIVによるT細胞機能不全の抗ミリストイル基ダイアボディによる治療法の開発
Project/Area Number |
17K08854
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Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
Principal Investigator |
林 宣宏 東京工業大学, 生命理工学院, 准教授 (80267955)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | 抗体 / ミリストイル化 / HIV |
Outline of Annual Research Achievements |
HIV遺伝子産物Nef(Negative factor)はT細胞のCD4とMHCクラスⅠをエンドサイトーシスによりダウンレギュレーションさせることで免疫機能の低下を誘発する。Nefは脂肪酸修飾(ミリストイル化)により細胞膜へ局在化することがその機能発現に必須であることが知られているので、ミリストイル基を抗体によりブロックしてNefの膜画分への移行を防げれば、免疫機能の低下によるAIDSの発症を防げられると考えられる。しかし、真核生物の細胞内タンパク質の約0.5-3%がミリストイル化されて細胞内シグナル伝達など多数の生体機能を担っており、結合力の強い抗ミリストイル基抗体を用いれば、他のミリストイル化タンパク質にも作用して副作用を引き起こす恐れがある。他方、ミリストイル基と細胞膜の親和性はKD=10-4Mであるので、本研究ではそれよりわずかに強くミリストイル基に結合するが、単独では低濃度であれば副作用を起こさない抗ミリストイル化抗体を抗体ライブラリーでクローニングし、それに標的化のための特異性が高く結合力の強い抗Nef抗体をつないだ、Nefのみの膜局在を阻害する二重特異性抗体の開発を目的とした。 これまでに、非免疫マウス抗体ライブラリー(免疫をしていないマウスの脾臓由来)から、1種類の抗ミリストイル基抗体と3種類の抗Nef抗体をそれぞれクローニングした。これらを用いれば、適切な結合力を持つクローンを組み合わせて二重特異性を有するリコンビナント抗体を開発できる。得られた抗体を調べたところ、in vitroでのHIV-Nefの膜結合の阻害能に関して有意な結果が得られ、AIDSの治療抗体薬としてのポテンシャルを当該抗体が有していることが分かった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
本研究では、先に取得(開発)済みの抗体をプロトタイプとして用いる計画であったが、本研究期間中により性能の高いプロトタイプ抗体取得の可能性が得られ、試行した結果、新たにプロトタイプ用の抗体が得られた。得られた抗体を調べたところ、in vitroでのHIV-Nefの膜結合の阻害能に関して有意な結果が得られ、AIDSの治療抗体薬としてのポテンシャルを当該抗体が有していることが分かった。当初は二つの抗体を組み合わせた二重特異性抗体によるAIDS治療を想定していたが、その前段階、プロトタイプとして用いる抗体にもHIV遺伝子産物の機能をある程度は阻害する可能性が示されたことは、当初の想定を上回る成果である。
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Strategy for Future Research Activity |
本研究期間中に新たに得られたより性能の高いプロトタイプ抗体を用いて、AIDSの治療に用いるための、HIV遺伝子産物Nefの膜局在を阻害する二重特異性抗体を開発する。まずは、in vitroで機能を確認したのち、擬似的にHIVに感染した状態になっている細胞にこの二重特異性抗体を導入し、本来の細胞機能が回復するかどうかを調べる。良好な結果が得られれば、動物レベルへの実験へと進み、将来は臨床に用いる抗体薬の開発へと進める。
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Causes of Carryover |
本研究では、先に取得(開発)済みの抗体をプロトタイプとして用いる計画であったが、本研究期間中により性能の高いプロトタイプ抗体取得の可能性が得られ、試行した結果、新たにプロトタイプ用の抗体が得られたので、これを用いてAIDS治療のための抗体薬を開発するように計画を変更する。 次年度使用額:817,167(円)
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