2019 Fiscal Year Annual Research Report
How does the acetylation of influenza virus NP affect on virus-host interactions?
| Project/Area Number |
17K08867
|
|---|
| Research Institution | Tokushima Bunri University |
|---|
Principal Investigator |
畠山 大 徳島文理大学, 薬学部, 准教授 (20514821)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | インフルエンザウイルス / NP / PA / アセチル化修飾 / SMARCA |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らは，ウイルス増殖過程においてNPが宿主のヒストンアセチル化酵素GCN5とPCAFにより，アセチル化されることを報告した（JBC, 2018）．本研究では，アセチル化NPと相互作用するタンパク質に焦点を当て，NPアセチル化の生物学的意義を解明する．過去の論文により，SMARCA2やSMARCA4といったブロモドメインタンパク質とNPとの結合が示されていることから，共沈降法でこれを確かめる実験を開始した．SMARCA2とSMARCA4の組換えタンパク質は既に作成済である．NPは，無細胞系システムを用いて，種々のタグを付加したものを発現させた．しかし，NP組換えタンパク質を大腸菌で作成すると，その過程で先にアセチル化されることが問題であったが，無細胞系システムを用いても同様にアセチル化されていた．今後は発現後に脱アセチル化酵素で処理することで，このアセチル化を外す実験を行う予定である．
また，NPの研究遂行中にPAのアセチル化も発見した．PAのエンドヌクレアーゼ活性は，ウイルス増殖過程において必要不可欠な反応である．我々の研究により，① PAがGCN5とPCAFによってアセチル化を受けること，② PAアセチル化によってエンドヌクレアーゼ活性が賦活化されること，③ アセチル化を受けるアミノ酸はK19であること，④ K19をグルタミンに変異させ（K19Q），定常的なアセチル化をミミックするとエンドヌクレアーゼ活性が賦活化されることなどを示した．また，アセチル化を受けないが，リジンの正電荷をミミックするアルギニンに変異させると（K19R），エンドヌクレアーゼ活性は増強されなかった．以上より，アセチル化によってPAのエンドヌクレアーゼ活性が調節されることが示唆された．
その他，エボラウイルスNPとVP40が試験管内においてアセチル化修飾されることも報告した（BBRC, 2018）．
|
-
-
-
-
-
-
[Presentation] Modulation of the PA endonuclease activity of influenza virus via acetylation2019
Author(s)
Hatakeyama D, Shoji M, Komatsu T, Saitoh A, Ohnishi A, Makiyama K, Ogata S, Nakano M, Kaga K, Hirose M, Noda T, Ohtsuki S, Kawaoka Y, Kuzuhara K
Organizer
Symposium on Influenza and Other Infections
-
-
