2019 Fiscal Year Annual Research Report
The establishment of diagnostic tool for causative microorganisms using laser capture microdissection
| Project/Area Number |
17K08988
|
|---|
| Research Institution | University of Miyazaki |
|---|
Principal Investigator |
高城 一郎 宮崎大学, 医学部, 准教授 (20418841)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡山 昭彦 宮崎大学, 医学部, 教授 (70204047)
越本 知大 宮崎大学, フロンティア科学総合研究センター, 教授 (70295210)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | Laser Microdissection / 細菌同定 / 16S rRNA / 感染症 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、臨床検体のグラム染色標本からLaser Capture Microdissection (LCM)で菌体を回収し、その菌体を遺伝子解析することにより菌種を同定し感染症の診療に役立てることを最終目標としている。2017年度においては大腸菌と黄色ブドウ球菌を用いてLCMを使用した細菌同定法を段階的に検討した。その結果、大腸菌ではアルカリ加熱法で、黄色ブドウ球菌からはAchromopeptidase (ACPase)とInstaGene Matrixを用いた方法を採用して16S rRNA遺伝子の検出を可能とした。また、腹膜炎モデルマウスにおいて10-20個の菌体を貪食した白血球から菌種を同定することが可能であった。2018年度においてはこれらの結果をまとめて、Journal of microbiological methodsに論文として報告した。さらに大腸菌と黄色ブドウ球菌以外の菌種として代表的な嫌気性菌であるバクテロイデス属菌について同様の方法による検出を試みたが、検出が困難であった。2019年度は溶菌操作や核酸抽出法を改良し、本菌を含めたさらに幅広い菌種の検討を行った。また細菌を試薬などで溶菌するよりも細胞に貪食された細菌の検出効率が高い傾向がみられた。単球-マクロファージ系細胞株(THP-1)を用いた細菌貪食実験を行い、貪食細胞数個をLCMで回収し黄色ブドウ球菌の検出効率が良いという結果を得たが、大腸菌は貪食そのものが認められなかった。現在、細菌を貪食した好中球を多数認める喀痰や細菌尿といった臨床検体を利用し、本方法の改善と問題点について検討を進めている。
|
