2017 Fiscal Year Research-status Report
Mechanisms of fibrin polymerization based on analysis for dysfunctional fibrinogen variants
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17K09009
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
奥村 伸生 信州大学, 学術研究院保健学系, 教授 (60252110)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平 千明 信州大学, 学術研究院保健学系, 助教 (40779310)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | フィブリノゲン / フィブリン重合反応 / IgA-λ型Ｍタンパク |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成29年度の研究では、IgA-λ型M蛋白によりフィブリノゲン(Fbg)機能異常（トロンビンによるフィブリン(Fbn)重合反応異常）を生じる原因を検討した。
初めに、抗IgAα鎖抗体を用いたimmuno-affinityカラムクロマトにより患者血清IgAを精製するとともに、IF-1モノクローナル抗体を用いたimmuno-affinityカラムクロマトにより患者血漿Fbgを精製した。対照として健常人患者血清IgAと血漿Fbgを精製した。
患者FbgにIgA-Mタンパクが結合しているかを、SDS-PAGEと抗Fbg抗体、抗IgA抗体を用いたWestern blot法で検出した。その結果、患者FbgにはわずかにIgA-Mタンパクが結合していることが明らかになった。一方、患者血漿中のIgAはFbgと結合していたとしても、精製段階で解離してしまうので、証明は困難であった。別の生成方法を検討しないと結論は出せない。
患者血漿を用いたFbn重合反応では著しい低下が観察されたが、精製患者Fbgの重合反応では、低下が観察されなかった。精製健常人血漿Fbg及び精製患者Fbgに精製患者血清IgAを添加する実験を行った。この結果、どちらもFbn重合反応においても低下を再現することはできなかった。
このため、患者血漿と健常人血漿にトロンビンを添加しFbn塊を形成させ走査型電子顕微鏡で観察したところ、患者血漿では正常のFbn塊とは全く異なる異常な塊が観察された。
以上の結果より、患者血漿中の多くのFbgはIgA-Mタンパクと結合しており、トロンビンによる異常な凝固反応を呈するが、精製したFbg中にはIgA-Mタンパクと結合したものの割合が非常に少なく、すなわちIgAが結合しているFbgの大部分が精製されないために、正常な凝固反応を阻害することができなかったと判断した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初計画していた実験は概ね実施できたが、最終的に血清中あるいは血漿中IgAにフィブリノゲンが結合しているかどうかの詰め実験が残っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
2年目である平成30年度は、血栓症を引き起こすホモのフィブリノゲンBβ鎖Ala68Thr変異の、トロンビンによる重合反応の異常の程度を明らかにする実験に移行する。昨年度からの準備は順調に進行しており、1年間で結論を得ることができる見通しである。
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[Presentation] Analysis of acquired dysfibrinogenemia caused by IgA monoclonal gammopathy with anaphylactoid purpura2017
Author(s)
Arai S, Takezawa Y, Mukai S, Nakagoshi R, Miyazaki A, Ishimine N, Kawasaki K, Taira C, Sugano M, Honda T, Okumura N
Organizer
29 th World Congress of World Association of Societies of Pathology and Laboratory Medicine
Int'l Joint Research
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