2018 Fiscal Year Research-status Report
猫ひっかき病急性期診断のための特異IgM抗体検出高感度ELISAの確立と病態解明
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17K09013
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
常岡 英弘 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (40437629)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大津山 賢一郎 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (10432741)
徳田 信子 獨協医科大学, 医学部, 教授 (70227578)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 猫ひっかき病 / ウエスタンブロット / IgM-WB |
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| Outline of Annual Research Achievements |
猫ひっかき病（CSD）の原因菌はBartonella henselae である。本菌の分離は極めて困難なため、CSDの診断は血清学的診断法が有用であり、本研究の第一目標はELISA法による特異B. henselae IgM抗体価測定法を確立することである。研究1年目では独自に改良したウエスタンブロット（WB）のCSD患者血清と健常人血清について解析を行った結果、8-10kDa,31-35kDa, 70kDaが主要なバンドであり、その半数は8-10kDaであることが判明した。その8-10kDaについてMALDI/TOFMSを用いた質量分析法解析より、遺伝子（6種類）を同定した。研究2年目では同定遺伝子を解析後、大腸菌による蛋白質作製を行い、患者血清との反応（IgM-WB）を試みたがいずれも不成功に終わった。そこで再度8-10kDaの解析を行ったところ、12種類の遺伝子の候補が得られ、うち8種類の遺伝子（ 8, 9, 10, 20, 26, 38, 44, 58kDa）が抽出できた。これらを解析後、今回は無細胞蛋白質合成を行い、患者血清との反応を試みたが今回も反応は認められなかったが蛋白合成手法の改良により同定が期待される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
ＷＢの主要バンド8-10kDaの蛋白解析に多大な時間を要した。またその合成蛋白質が患者血清と反応が見られず、その理由が未だ判明していない。
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| Strategy for Future Research Activity |
1）8-10kDaの遺伝子候補のうち、再度蛋白質の合成を試みると同時に未同定の蛋白質の同定も行い、その合成を試みる。
2）残りのCSD特異バンド31-35kDa,70kDaについて、蛋白質抽出後、同様に蛋白質同定を行う。
3）同定された新たな蛋白質をクローニング後、大腸菌あるいは無細胞蛋白質合成法で蛋白質を作製し、これら発現蛋白質の抗原性をIgM-WBで確認する。
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| Causes of Carryover |
当初の計画より、研究が遅れている分、若干の経費余剰が生じた。上記今後の推進方策の実施を目指し、有効利用したい。
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