Identification of microRNAs that regulate Galectin 9 to suppress nonalcoholic steatohepatitis progression

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K09014
• Research Institution: Kagawa University
• Principal Investigator: 森下 朝洋 香川大学, 医学部附属病院, 講師 (60423430)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 谷 丈二 香川大学, 医学部, 助教 (00596075) ; 正木 勉 香川大学, 医学部, 教授 (30335848) ; 藤田 浩二 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (50749421) ; 野村 貴子 香川大学, 医学部, 協力研究員 (70645415) ; 米山 弘人 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (80294750)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: マイクロRNA

Outline of Annual Research Achievements

WTマウスを用い、STAMマウスを作製、４週目より高脂肪食を与えたマウスに週3回90μg/日のガレクチン9を腹腔内投与、9週目(肝線維化出現)と16週目(肝細胞癌出現)に犠死させ、それぞれ肝組織内の脂肪化、炎症、線維化、肝細胞癌の有無、サイズを計測した。投与群、非投与群の肝臓を用いそれぞれマイクロRNAを抽出、ガレクチン9投与群にて著明に増減しているマイクロRNAを同定した。
また、ガレクチン9欠損マウスを用いSTAMマウスモデルを作成し、同様に犠死させ、それぞれ肝組織内の脂肪化、炎症、線維化、肝細胞癌の有無を解析した。また、マイクロRNAを抽出、ガレクチン9の欠損によって特異的に増減しているマイクロRNAを同定した。
次に、WTとガレクチン9欠損マウスの骨髄由来マクロファージを用いて、脂肪性肝炎時に脂肪細胞から分泌されるレプチン存在下でLPSを培養液に濃度別に投与し、免疫応答の代表的な分子であるCD14とTNFαを測定したところ、ガレクチン9欠損マウス由来のマクロファージではそれらの著明な亢進を認めた。よって、NASH改善効果に大切な役割を果たすM2様マクロファージ (肝ではクッパー細胞)において、ガレクチン9の分泌を制御ことが重要であることを見出し、それに関与するマイクロRNAを同定した。
同定したマイクロRNAのターゲット遺伝子をData baseから推定し、その遺伝子の発現調節を解析し、ガレクチン9のM2様マクロファージ内の下流シグナルを同定した。さらに、ターゲットマイクロRNAをCMVプロモーターのあるアデノウイルスベクターにサブクローニングし、高力価にしたあとに、STAMマウスの5週目のNASH形成直前に尾静脈より静注し、肝細胞に強発現させる。その後肝組織での脂肪化、炎症、線維化等、NASH進展の度合い、また肝発癌の状態を経時的に解析した。