2018 Fiscal Year Research-status Report
機能性胃腸症における胃の痛覚過敏へのCRF2を介したインターロイキン6の関与
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17K09031
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
尾崎 紀之 金沢大学, 医学系, 教授 (40244371)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥田 洋明 金沢大学, 医学系, 准教授 (40453162)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | IL-6 / サイトカイン / 内臓痛 / 胃痛 / CRF / ストレス / 免疫組織化学 / 中和抗体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はラットにwater avoidance stressを毎日2時間、10日間加えるとストレス後に胃の痛覚が亢進し、この痛覚亢進には副腎皮質刺激ホルモン放出因子(CRF)の受容体のうちCRF2が関与していることを報告している(Kozakai, Ozaki et al., 2016)。CRF2が痛覚亢進に関わるメカニズムを明らかにするため、以下の項目について調べた。
１．ストレスによる胃の痛覚過敏への炎症性サイトカインIL-6の拮抗薬の効果
胃については報告が無いが、大動脈平滑筋ではCRF2の活性化でIL-6の発現と分泌が亢進するとの報告がある。そこで、炎症性サイトカインIL-6に対する中和抗体を投与したときの、胃の痛覚亢進への効果を調べた。water avoidance stressによって痛覚が亢進したラットにIL-6中和抗体を投与し、対照群にはIgGを投与した。IL-6中和抗体を投与した群では、ストレスで亢進した痛覚が有意に抑制された。対照群では、変化はなかった。
2. CRFおよびその受容体の胃粘膜での発現局在
CRFファミリーであるCRF、Ucn1、Ucn2および、受容体であるCRF2の発現を免疫組織学的に調べて定量的に評価した。CRFは固有胃腺の腺細胞に、Ucn1およびUcn2は粘膜固有層深部の結合組織細胞に、受容体であるCRF2は粘膜固有層深部の結合組織細胞と、少数ながら固有胃腺の腺細胞に発現していた。そのうちUcn2とCRF2は、肥満細胞とその他の結合組織細胞に発現していた。ストレスを加えると、CRF2を発現する細胞が有意に増加していたが、CRF、 Ucn1、Ucn2、肥満細胞の数に変化はなかった。ストレスを加えると肥満細胞以外のCRF2陽性の結合組織細胞が増加し、ストレスによる胃の痛覚の亢進に関与していることが明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
IL-6の胃粘膜で発現を免疫組織学的に同定することを試みているが、これまでの実験では、胃でのIL-6発現細胞が免疫組織学的にうまく染まっておらず、同定ができていない。抗体の問題、組織の固定条件等を検討している。免疫組織学的な検討が上手くいかない場合western blottingによる、IL-6の量的な検討を行ったり、in situ hybridizationに変更したりすることも検討する。
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| Strategy for Future Research Activity |
IL-6の胃粘膜での発現を免疫組織学的に同定する研究については、抗体、組織の固定条件等の検討を進め、免疫組織学が上手くいかない場合は、western blottingによるIL-6の量的な検討を行ったり、in situ hybridizationに変更したりすることを検討する。
ストレスを加えると、肥満細胞以外の結合組織細胞でのCRF2の発現が増加することが明らかになった。ストレスによる結腸での痛覚の亢進では、肥満細胞の関与が報告されており、胃と腸の痛覚亢進のメカニズムの違いとして興味深いと考えている。肥満細胞以外の候補として大食細胞などでのCRF2の発現と、ストレスによる変化を調べる。
その他は、当初の研究計画に沿って研究を進める。
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| Causes of Carryover |
多重免疫組織化学を計画していたが、抗体が上手く染まらず、染色条件設定を進めており、次の抗体の購入が遅れているため。また、当初予定していたmast cellの多重染色に加え、macrophageの染色が必要になり、そのための条件設定も行っている。これらの条件設定が上手くいき次第、これらの抗体を購入するために使用する。
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[Journal Article] Vascular RAGE transports oxytocin into the brain to elicit its maternal bonding behaviour in mice.2019
Author(s)
Yamamoto Y, Liang M, Munesue S, Deguchi K, Harashima A, Furuhara K, Yuhi T, Zhong J, Akther S, Goto H, Eguchi Y, Kitao Y, Hori O, Shiraishi Y, Ozaki N, Shimizu Y, Kamide T, Yoshikawa A, Hayashi Y, Nakada M, Lopatina O, Gerasimenko M, Komleva Y, Malinovskaya N, Salmina AB, Asano M, Nishimori K, Higashida H et al.,
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Journal Title
Commun Biol
Volume: ２
Pages: 76
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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