新規グレリン受容体結合蛋白PLA2G16の消化管癌細胞における役割

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K09344
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 武田 宏司 北海道大学, 薬学研究院, 教授 (60261294)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: グレリン受容体

Outline of Annual Research Achievements

GHS-R1a/PLA2G16が発現している消化管癌細胞株について、細胞増殖、アポトーシスに与えるGHS-R1aアゴニスト、インバースアゴニス トの影響を検討したが安定した結果が得られなかったため、予定を変更し、GHSR1aを安定的に発現したHEK293細胞を作製して解析をおこなった。まずHEK293細胞においてGHS-R1aとAdPLAの結合性を再確認したところ、GHS-R1a とAdPLAの結合が再確認された。しかしながら、β2アドレナリン受容体 とAdPLAとの結合は確認されなかったことから、GHS-R1a とAdPLAの結合は特異的であることが明らかとなった。また、GHS-R1aのC末端を欠損させた変異体（GHS-R1aΔC)を一過性に発現させたHEK293細胞において、GHS-R1aΔCとAdPLAの結合性が確認された。以上より、GHS-R1aとAdPLAは特異的に結合することおよびその結合にはGHS-R1aのC末端は関与しないことが明らかとなった。一方、HEK293細胞においてGHS-R1a を一過性に発現させると、ユビキチン化されて分解すること、その分解はMG132で阻害されることから、GHS-R1a はプロテアソームで分解されることが明らかとなった。また、GHS-R1aΔCを発現させた場合は分解されず、GFPを結合させたC末端は速やかに分解された。以上より、GHS-R1a の安定性が、C末端で制御されていると考えられた。興味深いことに、膵癌細胞株Panc-1細胞にGHS-R1a を一過性に発現させた場合は、GHS-R1a の分解は生じなかった。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

実験結果が安定せず、繰り返し再現実験をおこなっているため。

Strategy for Future Research Activity

各種消化管細胞株においてGHS-R1a の安定性を確認する。また、GHS-R1a およびAdPLAの共発現により、GHS-R1aを介した情報伝達およびAdPLA活性にどのような影響を与えるかを検討する。