2017 Fiscal Year Research-status Report
Analysic of the gastric stem cell carcinognic mechanism and application of stem cell marker for gasgtric cancer prevention and therapy
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17K09346
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
平田 喜裕 東京大学, 医科学研究所, 准教授 (10529192)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山田 篤生 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (80534932)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 胃癌 / 幹細胞 / ヘリコバクター / オルガノイド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
H29年度はLgr5-creERTマウス、K19-creERTマウスとTGFbR2f/fマウスを交配し、コンディショナルノックアウトを樹立し、6w齢でタモキシフェンを経口投与して遺伝子変異を誘導した。1w後よりヘリコバクターPMSS1株を経口感染させ、現在経過観察中である。感染後6M~12Mで胃組織を摘出し、病理変化、免疫染色による分化マーカー発現などを検討する予定である。また野生型マウスにPMSS1を4M感染させた胃粘膜を解析した。とくに体部粘膜にGSII/TFF2またアルシアンブルーで染色される化生性変化が見られ、さらに胃幹細胞マーカーであるCD44v6が化生粘膜に一致して発現増加していた。またヘリコバクター感染胃炎における体部主細胞などのLgr5陽性細胞の機能を検討するためにLgr5陽性細胞特異的にジフテリアトキシン受容体を発現させ、ヘリコバクター胃炎発症後にジフテリアトキシンを投与してLgr5陽性細胞を選択的に排除した。感染4M後の胃粘膜ではGSIIやアルシアンブルー陽性化生粘膜が同様にみられ、ヘリコバクター胃炎においてLgr5陽性主細胞が化生変化に果たす役割は限定的であると考えられた。
また胃体部の胃底腺から三次元培養にて作成したオルガノイドにTGFb R2ノックアウト、活性型Krasの遺伝子変異を導入し、遺伝子改変オルガノイドを作成した。イムノブロットによりTGFbR2の発現消失と、Kras下流分子であるErkのリン酸化の亢進を確認した。マトリゲル内における三次元培養においては、野生型に比べて増殖の亢進、オルガノイドのサイズの増大がみられた。また、EGF非依存性の細胞増殖、維持が可能であった。現在このオルガノイドの造腫瘍能についてヌードマウスに接種して検討中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ヘリコバクター感染後の幹細胞マーカーの変化を解析済みであり、一部Lgr5陽性主細胞の役割についても解析した。またオルガノイドの腫瘍化遺伝子についての検討も開始している。
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| Strategy for Future Research Activity |
Mist1陽性細胞の役割を検討するためにMist1陽性細胞特異的遺伝子変異モデルを作成する。またオルガノイドを用いた癌化メカニズムの解析を継続し、遺伝子変異の役割と幹細胞の機能を解明する。
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[Journal Article] Mature gastric chief cells are not required for the development of metaplasia.2018
Author(s)
Kinoshita H, Hayakawa Y, Niu Z, Konishi M, Hata M, Tsuboi M, Hayata Y, Hikiba Y, Ihara S, Nakagawa H, Hirata Y, Wang TC, Koike K.
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Journal Title
Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol
Volume: 314
Pages: G583-G596
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
