2017 Fiscal Year Research-status Report
in vitro発癌モデルの開発と臨床応用を目指した胃型化・腸型化メカニズム解明
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17K09355
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
溝下 勤 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (40347414)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
片野 敬仁 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (50768372)
城 卓志 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30231369)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | in vitro 三次元培養腺管 / 胃幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は、研究目的である「臨床に外挿できるin vitro胃・大腸発癌モデルの樹立」を確立するため種々の検討を行い、平成29年度は、以下のような研究成果を得た。
1.長期三次元培養系でのin vitroマウス胃発癌モデルの樹立のため、我々が確立したin vitro 三次元培養系（Am J Pathol., 185, 798-807, 2015.）でマウス腺胃組織由来の切片を培養し、定着したgastrospheres（三次元培養腺管+線維芽細胞の集団）にN-methyl-N-nitrosourea（MNU）などを加えて長期培養し、発癌過程を胃型・腸型形質発現を含めて検索中である。同様に、in vitroラット大腸発癌モデルの樹立のため、ラット大腸由来の切片を前述のin vitro 三次元培養系で培養し、さらに2-Amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine（PhIP）などを加えて長期培養し、異常陰窩巣(Aberrant crypt foci：ACF)の解析を含めて発癌過程を検索中である。また、Helicobacter pylori感染胃発癌モデルとして有名であるスナネズミの腺胃組織由来の切片をin vitro 三次元培養系で培養し、長期培養を試みている。
2.我々は、炎症性発癌の一つであるcolitic cancerでの胃型化のメカニズムの解明も研究目的としている。この目的を達成するため、まずcolitic cancer症例を病理学的に解析し、胃型・腸型発現も含めて検索している。加えて、adalimumabあるいはinfliximabを投与している難治性潰瘍性大腸炎症例において、臨床的な検討も行った（Medicine (Baltimore), 96, e7800, 2017.）。
以上が、平成29年度の研究実績である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成29年度の研究計画調書記載内容と照らし合わせた研究の進行度は、以下の如くである。1. 長期三次元培養系でのin vitroマウス胃発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析：マウス腺胃組織由来の切片をin vitro 三次元培養系で培養し、定着したgastrospheresに化学発癌剤であるMNUなどを加えて長期培養し、胃型（MUC5AC、MUC6）・腸型（MUC2、villin）形質発現を含めて発癌過程を検索中である。また、幹細胞マーカーのLgr5、Bmi1、Musashi-1について、RNA in situ hybridizationなどで可視化を試みている。2.長期三次元培養系でのin vitroスナネズミ胃発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析：Helicobacter pylori感染胃発癌モデルとして有名であるスナネズミの腺胃組織由来の切片を前述のin vitro 三次元培養系で培養し、長期培養を試みている。3. 長期三次元培養系でのin vitroラット大腸発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析：in vitro 三次元培養系でラット大腸由来の切片を培養し、化学発癌剤であるPhIPなどを加えて長期培養し、発癌過程を異常陰窩巣(Aberrant crypt foci：ACF)の解析を含めて検索中である。上記に加えて、colitic cancer症例の病理学的な解析や、adalimumabあるいはinfliximabを投与している難治性潰瘍性大腸炎症例において、臨床的な検討も行い英語論文を作成した（Medicine (Baltimore), 96, e7800, 2017.）。以上より、区分は（2）と考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
我々は、研究計画調書記載内容と照らし合わせて今後の研究の推進方策につき以下のことを考えている。
まず前述の「1. 長期三次元培養系でのin vitroマウス胃発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析」、「2.長期三次元培養系でのin vitroスナネズミ胃発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析」、「3. 長期三次元培養系でのin vitroラット大腸発癌モデルの樹立と継時的・動的な発癌プロセスの解析」、については、さらに検討を進める。特にHelicobacter pylori感染胃発癌モデルとして有名なスナネズミの腺胃のin vitro 三次元培養系の確立に力点を置きたいと考えている。これらに加えて、研究計画調書に記載した「6. 長期経過の潰瘍性大腸炎に合併したcolitic cancer cellの胃型化の分子病理学的解析」にも力点をおいて研究を進める予定である。すでに、colitic cancer症例の病理学的解析を進めており、加えてadalimumabあるいはinfliximabを投与している難治性潰瘍性大腸炎症例での臨床的な検討も行い英語論文も作成しているため（Medicine (Baltimore), 96, e7800, 2017.）、これらの症例の解析をさらに進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
購入予定であった実験動物であるスナネズミ（Mongolian gerbil, SLC Japan Inc.）、各種薬品（ウェスタン解析関連試薬、PCR関連試薬、各種抗体、等）、病理組織・細胞培養関連およびプラスチック器具、Sox2（Chemicon）・Cdx1（Abcam）・Cdx2（BioGenex）・Mib1（Abcam）・LGR5（Abgent）・Bmi1（Cell Signaling Technology）・Musashi-1（Cell Signaling Technology）などの免疫組織化学染色関連の各抗体が平成29年度の年度末（平成30年3月末）までに購入できなかったため。使用計画：平成30年度に上記抗体を購入し、研究を継続する予定である。
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[Journal Article] Prospective comparison of preference and efficacy of adalimumab and infliximab for treating ulcerative colitis naive to antitumor necrosis factor therapy2017
Author(s)
Mizoshita, T., Katano, T., Tanida, S., Hirano, A., Miyaki, T., Ozeki, K., Suzuki, Y., Sugimura, N., Kataoka, H. & Joh, T.
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Journal Title
Medicine (Baltimore)
Volume: 96
Pages: e7800
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Adalimumab therapy in a patient with Crohn's disease with a giant pelvic paraganglioma after chemotherapy2017
Author(s)
Mizoshita, T., Ando, M., Sagawa, H., Mori, Y., Katano, T., Ozeki, K., Tanida, S., Okamoto, Y., Shimura, T., Kubota, E., Kataoka, H., Kamiya, T. & Joh, T.
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Journal Title
Clin J Gastroenterol.
Volume: 10
Pages: 250-254
DOI
Peer Reviewed
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