2017 Fiscal Year Research-status Report
胃がん細胞におけるPD-L1タンパク質膜輸送システムの解明と免疫療法への応用
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17K09357
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
城 卓志 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30231369)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
東山 繁樹 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 教授 (60202272)
久保田 英嗣 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (30405188)
日吉 裕美 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (10406530) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 胃癌 / PD-L1 / CUL3 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、胃癌細胞株13種（KATOIII, MKN', MKN28, MKN45, MKN7, NUGC-3, NUGC-4, SUN-1, SUN-16, NCI-N87, GCIY, HGC27, OCUM-1)を用い、PD-L1蛋白の発現をWestern blotにより解析した。MKN7, NUGC-3でPD-L1の強い発現を確認できたた。
次に、これらの13種類の胃癌細胞株を用い、CUL3ノックダウンによりPD-L1の発現が増大するかについて検討した。CUL3ノックダウンには2種類のsiRNAを用いた。PD-L1が強く発現しているNUGC-3ではCUL3ノックダウンにより、PD-L1の発現がさらに増強した。さらにMKN28, NUGC-4では、PD-L1の発現はほとんどみられなかったが、CUL3ノックダウンによりPD-L1が発現した。一方、NCI-N87では、CUL3ノックダウンによりPD-L1の発現が低下した。残りの胃癌細胞株については、CUL3ノックダウンによりPD-L1発現に変化は認めなかった。なお、これらの実験は2種類のsiRNAを用いて検討しており、２種のsiRNAで結果が一致していることが確認できた。今後は、これまの検討にからCUL3の発現とPD-L1の発現に関連を認めた細胞株を中心に、PD-L1の発現と関連したBTB蛋白の探索を行い、PD-L1の発現をコントロールしているCUL3-BTB蛋白軸の同定を試みる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
BTBPとCUL3の結合スクリーニングの作業が想定より遅れているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
CUL3ノックダウンと同等にPD-L1蛋白質量の増大をきたすBTBPをウエスタンブロット法により同定し、標的とするBTBP遺伝子を絞り込む。
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| Causes of Carryover |
一部の実験の調整がつかず、試薬の購入予定代金を使用しなかったため。
本年度に、進歩が遅れているBTBPとCUL3の結合スクリーングを含めた実験を行う予定である。
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[Journal Article] The CUL3-SPOP-DAXX axis is a novel regulator of VEGFR2 expression in vascular endothelial cells2017
Author(s)
Sakaue T, Sakakibara I, Uesugi T, Fujisaki A, Nakashiro KI, Hamakawa H, Kubota E, Joh T, Imai Y, Izutani H, Higashiyama S
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 7
Pages: 42845
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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