Inhibitory effect of intestinal epithelial necroptosis via FLIP by cyclosporine

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K09367
• Research Institution: Hirosaki University
• Principal Investigator: 櫻庭 裕丈 弘前大学, 医学研究科, 准教授 (90422063)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: ネクロプトーシス / シクロスポリン

Outline of Annual Research Achievements

マウス(C57BL/6)に４％DSSを自由飲水させた急性腸炎モデルにおいてシクロスポリン投与による、ネクロプトーシス調節分子の発現の変化について経時的な解析を行った。DSS投与０，１、２日目の分離した腸上皮から蛋白抽出を行いネクロプトーシス調節分子RIPK3, AMPKの発現をウェスタンブロットで解析した。
DSS投与０、１，２日目いづれにおいてもコントロール群とシクロスポリン投与群との間に有意な発現の差は認めなかった。一方、ネクロプトーシスからの炎症
誘導メディエーターであるHMGB-1の発現は、分離した腸上皮細胞分画においては、DSS投与０，１日目でコントロールに比べてシクロスポリン投与群で有意に抑制されていた。粘膜下組織の分画では、DSS投与2日目において、コントロールに比べてシクロスポリン投与群で有意に抑制されていた。ネクロプトーシス調節因子であるRIPK3, AMPKを介さない、MLKL及びRIPK1の発現抑制効果の存在が示唆された。
RIPK3, AMPK以外のネクロプトーシス調節因子であるMLKL及びRIPK1などを介したHMGB-1の発現抑制効果、またはネクロプトーシス調節因子そのものを介さずに炎症誘導物質の産生を抑制する可能性が考えられる結果が得られた。そのため、分離した上皮細胞のMLKL及びRIPK1の発現について解析したが、シクロスポリン投与による発現の抑制効果は認められなかった。DAMPmoleculeについてHMGB-1以外にHSP60, 70の発現も検討したが、シクロスポリンによる発現の変化は認めなかった。
IL-33、IL-1βについての追加解析を行ったが、そちらも優位な差は認めなかった。シクロスポリンによる腸上皮細胞のネクロプトーシスの制御効果を示す結果が得られなかった。これまでの研究で報告してきたアポトーシス制御が主な作用機序であると考えられた。