2017 Fiscal Year Research-status Report
A new development of antivirals for eradication of HBV cccDNA
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17K09400
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
森川 賢一 北海道大学, 大学病院, 助教 (60384377)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂本 直哉 北海道大学, 医学研究院, 教授 (10334418)
須田 剛生 北海道大学, 大学病院, 特任助教 (20447460)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | B型肝炎ウイルス / cccDNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HBV cccDNAの合成機序の解明:HBVウイルス培養系（Hep2.2.15.7細胞）より回収したHBVウイルス粒子をHepG2-NTCP細胞（HBV感染受容細胞）へと感染実験を行い、HBVポリメラーゼ阻害剤を用いて核内で脱核したrelaxed-circular DNA(rcDNA)からcccDNAへの合成がどの程度阻害できるかを、濃度依存的に検討した。短期間の投与ではrcDNAからcccDNAへの合成阻害は、あまり認められないことが確認された。これは、臨床的知見と比較しても矛盾しない結果であると考えられた。また、感染細胞より核分画を抽出し、cccDNA合成群より抽出した成分とcccDNA非合成群より抽出した成分をmicroarrayやプロテオームを用いた網羅的手法を用いて半比較定量的に解析中であり、cccDNA合成に関与する可能性のある宿主因子の同定を行う予定である。
HBV cccDNAの転写活性機序の解析：HBV蛋白のなかでもHBx蛋白は転写活性に重要な役割を果たすと報告されている。これまで既知のHBx蛋白結合エピトープ部位を元にHBxの分子モデリングと分子動態学シミュレーションを行い新規転写調節エピトープについて探索を行った。HBV遺伝子のmRNAやオープンリーディングフレームの重複といった部位は、RNAiに適した標的となるため、同定エピトープを標的としたRNAiの発現プラスミドを用いた細胞およびマウスモデルの実験で転写や翻訳の抑制へと至るかどうか確認した。HBxに対するsiRNAにより、pgRNAの転写の抑制及びHBc抗原、HBs抗原の細胞内翻訳の減少が確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
実験の条件検討にやや時間を有したが、現在遅れを取り戻すため、急ピッチで網羅的解析を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度は、microarrayやプロテオームを用いた網羅的手法を用いて半比較定量的に解析することにより、cccDNA合成に関与する可能性のある宿主因子の同定を行う予定である。また、cccDNA転写活性に関与する可能性のある宿主因子の同定を行っていく。
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| Causes of Carryover |
物品購入が、予定内で使用可能であったため多少の余剰金が発生した。次年度に組み込み使用させていただく予定である。
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[Presentation] Prevalence and risk factors of hepatitis B virus reactivation in interferon-free direct-acting antiviral therapies for hepatitis C.2017
Author(s)
Kawagishi N, Suda G, Onozawa M, Kimura M, Maehara O, Ohara M, Izumi T, Umemura M, Ito J, Nakai M, Sho T, Natsuizaka M, Morikawa K, Ogawa K, Sakamoto N.
Organizer
The European Association for the Study of the Liver (EASL) International Liver Congress. (Amsterdam, Netherlands)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Hepatitis B virus X protein modulates host restriction factor via interaction with DDB1.2017
Author(s)
Izumi T, Morikawa K, Ando S, Takeda R, Umemura M, Shimazaki T, Kawagishi N, Ohara M, Ito J, Nakai M, Sho T, Suda G, Ogawa K, Sakamoto N.
Organizer
The Asian Pacific Association for the Study of the Liver (APASL) Single Topic Conference. (Nagasaki, Japan)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Influence of hepatitis B virus genotypes on innate immune response by impairing Mitochondrial Antiviral Signaling Protein.2017
Author(s)
Umemura M, Morikawa K, Ando S, Takeda R, Izumi T, Shimazaki T, Kawagishi N, Ohara M, Ito J, Nakai M, Sho T, Suda G, Ogawa K, Sakamoto N.
Organizer
The Asian Pacific Association for the Study of the Liver (APASL) Single Topic Conference. (Nagasaki, Japan)
Int'l Joint Research
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