2019 Fiscal Year Annual Research Report
Discovery of HCC progression-related cancer genes through in vivo forward genetic screen
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17K09422
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
小玉 尚宏 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (10623275)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
巽 智秀 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (20397699)
疋田 隼人 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (20623044)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 肝細胞癌 / CRISPR / 遺伝子スクリーニング / NASH / トランスポゾン / Hippo経路 / Sav1 / Pten |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は先行研究において、In vivoにおける網羅的な癌遺伝子同定法であるトランスポゾン挿入変異スクリーニングを行い、肝癌のドライバー候補遺伝子を多数同定した。そこで、これら遺伝子群の肝癌における意義を生体内で明らかにすることを目的として本研究を行った。平成２９年度にまず生体内で検証を行うためのマウスモデルの作成を行った。肝細胞特異的かつタモキシフェン依存的にKras持続活性化並びにPtenが欠損するマウスを作成したところ、タモキシフェン投与約３ヶ月において脂肪肝から肝癌を発症することを確認した。平成３０年度はトランスポゾンスクリーニングにより同定された候補遺伝子を標的としたプール型CRISPR/Casライブラリーを作成した。このライブラリーを昨年度作成した肝発癌マウスモデルに対してHTVi法により導入したところ、ライブラリー導入群において有意に発癌形成の促進を認めた。平成３１年度はライブラリー導入群において発症した癌と周囲の非癌肝からゲノムDNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いてエクソームシークエンスを行った。その結果、癌部においてのみCRISPR/Casの標的部位に対するInDel形成を複数の遺伝子で認めた。中でも、Sav1遺伝子に対する高頻度のIndel形成を認められ、Sav1遺伝子の欠損が脂肪肝からの肝癌発症を促進していると考えられた。そこで脂肪肝を発症する肝特異的Pten欠損マウスにおいて更にSav1を欠損させたところ、このマウスでは脂肪肝からの肝癌発症が有意に促進した。更に、非ウイルス性肝細胞癌患者の遺伝子発現データを検討したところ、Pten・Sav1の発現は癌部で有意に発現が低下しており、両遺伝子の発現低下症例は有意に予後不良であった。以上から本家研究により、脂肪肝からの肝癌発症にSav1遺伝子が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
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